動(dòng)物模型的前序檢測--中和抗體檢測
中和抗體（nAb）可以通過多種機(jī)制介導(dǎo)抗病毒功能，包括中和作用和抗體效應(yīng)功能，可用于指導(dǎo)病毒疫苗設(shè)計(jì)，或作為抗病毒藥物用于預(yù)防和治療病毒性疾病中。中和抗體檢測可快速檢測樣本（24h即可出結(jié)果），并適用于高通量的檢測方式，可快速了解候選化合物的有效性。單純皰疹病毒（herpes simplex virus，HSV，圖1）是皰疹病毒的典型代表，由于感染急性期發(fā)生水皰性皮炎即單純皰疹而得名。一般認(rèn)為HSV病毒通過附著（attachment）和融合（fusion）兩個(gè)步驟完成入侵細(xì)胞，這一過程涉及多種宿主細(xì)胞表面受體和病毒包膜蛋白相互作用。
圖1. HSV病毒結(jié)構(gòu)示意圖
迪福潤絲生物自有的CRO服務(wù)平臺(tái)「DIFF+」可針對HSV疫苗及藥物進(jìn)行評(píng)價(jià)，提供基于細(xì)胞病變效應(yīng)法（Cytopathic Effect, CPE）的HSV中和抗體檢測服務(wù)（圖2）。
圖2. HSV中和抗體檢測流程圖
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單純皰疹疫苗動(dòng)物模型
一般而言，通過中和抗體檢測篩選出中和效果理想的候選物后，可以利用動(dòng)物模型進(jìn)行進(jìn)一步的評(píng)價(jià)，利用合適的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來評(píng)估急性或持續(xù)性感染的情況。研究HSV的常用模型有近交小鼠模型、大鼠模型和豚鼠模型，小鼠模型的主要優(yōu)點(diǎn)是可利用多種試劑來研究免疫和分子生物學(xué)反應(yīng)；生殖器棉鼠模型服用甲羥孕酮后四天，可在陰道中感染HSV-1和HSV-2，目前該模型正用于評(píng)估臨床試驗(yàn)中使用的gD疫苗；備受關(guān)注的還有HSV-2生殖器豚鼠模型，主要優(yōu)點(diǎn)是受感染的動(dòng)物會(huì)發(fā)展出易于量化的急性自限性疾病，有很容易發(fā)現(xiàn)的自發(fā)性復(fù)發(fā)。
具體來說，使用豚鼠模型來進(jìn)行HSV疫苗評(píng)價(jià)時(shí)，研究人員通常關(guān)注以下幾方面：
1. 急性期感染的癥狀：豚鼠在感染HSV后會(huì)表現(xiàn)出類似于人類的局部皮膚或黏膜損傷，這可以幫助評(píng)估疫苗對初次感染的預(yù)防效果。
2. 復(fù)發(fā)性病變：HSV在人體中可以進(jìn)入潛伏期，并在特定條件下復(fù)發(fā)。豚鼠模型也會(huì)出現(xiàn)類似的復(fù)發(fā)現(xiàn)象，通過研究復(fù)發(fā)頻率和嚴(yán)重程度，可以評(píng)估疫苗對抑制病毒復(fù)發(fā)的作用。
3. 免疫反應(yīng)：豚鼠模型能夠產(chǎn)生人類相似的體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)，這有助于評(píng)估疫苗誘導(dǎo)的免疫保護(hù)機(jī)制。
4. 病毒載量和排毒：研究人員可以通過檢測豚鼠體內(nèi)的病毒載量和病毒從黏膜中的排毒量，來評(píng)估疫苗對病毒復(fù)制的抑制作用。
HSV豚鼠模型是當(dāng)前有效的研究工具，用于測試HSV疫苗的保護(hù)效果和免疫機(jī)制，并幫助研究人員改進(jìn)疫苗設(shè)計(jì)。
HSV-2豚鼠模型服務(wù)
迪福潤絲生物采用豚鼠進(jìn)行HSV-2動(dòng)物攻毒可產(chǎn)生明顯的體重變化（圖3）與病變（圖4），根據(jù)實(shí)際癥狀，設(shè)置了相應(yīng)的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，具體的案例模型評(píng)分如下（圖5）：
· 1分：生殖器紅腫并產(chǎn)生皰疹，
· 2分：多個(gè)皰疹融合成片，
· 3分：皰疹潰爛流膿，
· 4分：皰疹潰爛流膿發(fā)黑+大小便失禁，
· 5分：皰疹潰爛流膿發(fā)黑+大小便失禁+四肢無力或癱瘓，
圖3. HSV-2豚鼠攻毒體重變化（不同劑量攻毒）
圖4. HSV-2豚鼠攻毒實(shí)際癥狀變化
圖5. HSV-2豚鼠攻毒模型案例評(píng)分
HSV-2豚鼠攻毒毒株信息
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毒株類型 |
毒株名稱 |
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HSV毒株 |
HSV-2 |
MS |