硫黃素T檢測
硫黃素T (Thioflavin T) 是一種熒光染料，可以和富含β折疊的結構結合，例如α-突觸核蛋白原纖維。一旦結合，硫黃素T的發射光譜就會發生紅移 ，并且熒光強度會增強，這是一個很好的用來檢測原纖維形成的測試。
以下是用α-突觸核蛋白前體原纖維和單體做的硫黃素T檢測的操作指南。
? 用蒸餾水制備1mM硫黃素T儲備溶液 (新鮮制備并使用0.2μm 注射器過濾器過濾)
? 用PBS pH 7.4稀釋硫黃素T，確保每個孔中的硫黃素T最終濃度為25μM(每孔溶液體積=100μL). 孔板: Lumox96多孔孔板 (Sarstedt Catalog # 94.6000.024)
? 在將要使用之前才把alpha突觸核蛋白小份在室溫下解凍
? 在相應的孔中加入10μM 前體原纖維或者100μM 單體 (或兩者都有). 用移液器將孔中液體上下吸入排出混合. 濃度為估計值，需要優化來得到好的信號，并避免浪費
? 在密封孔板然后置于震蕩孵育器中 (600rpm)，37°C孵育
? 用Molecular Devices Gemini XPS微孔板讀板機讀取熒光讀數，使用軟件是Softmax Pro版本為6.5.1
XPS 酶標儀設置參數:
溫度：37°C
讀取形式：孔板掃描
波長：激發光450nm，發射光485nm
PMT增益：自動
閃光每讀：6
震蕩：讀數前20秒
? 再次密封孔板置于震蕩孵育器下37°C
? 1到72小時常規區間讀數
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