在細胞培養過程中,支原體和黑膠蟲污染是兩個常見的問題,它們會對細胞的生長、代謝和實驗結果產生嚴重影響。今天,我們就來揭開它們的神秘面紗,并探討如何應對這些麻煩制造者。
支原體是一種極其微小的原核生物,體積微小,能輕易穿透常規濾膜和抗生素屏障,成為細胞培養中最棘手的污染源之一。支原體污染的特征包括細胞增殖速度減緩、細胞形態異常(如拉絲、鋪展等),且培養基通常不會渾濁。支原體感染后,細胞可能會出現生長遲緩、代謝速率改變,甚至導致細胞死亡,嚴重影響實驗結果的可靠性。
支原體放大后:
支原體污染的特征:
1. 細胞增殖速度減緩、上清液依然清澈、大多數背景干凈,但細胞形態可能出現異常,如拉絲、鋪展等現象。
2. 晚期支原體污染會導致細胞培養基變酸性,但通常沒有明顯的跡象表明培養物受到污染。
3. 哺乳動物細胞培養物的特征:在污染的早期階段,支原體通常不會引起培養基的pH值變化,也不會對哺乳動物細胞產生顯著的毒性影響。支原體的生長主要與哺乳動物的細胞膜有關。在許多情況下,沒有支原體污染的跡象,然而,支原體可引起細胞生長特性的變化、細胞代謝的抑制、核酸合成的破壞、染色體畸變、細胞膜抗原性的變化,并可改變轉染率和病毒可接受性。
4. 這些“微小盜賊”通過吸取細胞營養,導致細胞生長受阻,形態異常、甚至死亡,嚴重影響實驗結果的可靠性。
預防措施:定期對培養箱、工作臺等設備進行消毒。選擇經過嚴格檢測的培養基和血清。減少血清的凍融次數,及時更換培養液并保持培養環境的清潔,嚴格遵守無菌操作規程,避免交叉污染。
抗生素:細胞培養中使用的大多數常規抗生素對支原體無效。硫酸慶大霉素、硫酸卡那霉素和酒石酸泰樂菌素在一定程度上是有效的,但可能只是抑制性的,而不是殺支原體的。
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