細胞的EV主要是指：外泌體、微泡和凋亡小體；身體在各種體液中都含有大量 EV，包括血漿、尿液甚至牛奶。血漿衍生的 EV 具有抗炎、抗氧化和促血管生成（促進血管生成）特性，目前正在被研究用于治療不同的條件，如心臟損傷、骨關節炎、傷口、衰老和肌肉損傷。富含血小板的血漿 (PRP) 成為另一種令人興奮的來源，為 EV 提供了再生潛力。 EVs可以促進細胞增殖和血管形成，有助于受傷后的組織修復。

分離細胞外囊泡（EVs），尤其是外泌體，通常涉及一系列離心步驟，以去除細胞碎片和較大的細胞器，然后進行超速離心以富集EVs。

分離步鄹開始啦！

1. 細胞培養和上清收集:
培養細胞，通常是貼壁細胞，并在合適的培養基中生長。
收集細胞培養上清，去除血清（通常使用無血清培養基或預先去除血清的培養基），以避免血清中的蛋白質干擾。
收集上清后，進行一系列低速離心步驟，去除細胞和較大的細胞碎片。

2. 低速離心:
首先，4°C，300×g，離心10分鐘，去除細胞和細胞碎片。
然后，4°C，2000×g，離心10分鐘，進一步去除較大的細胞器。
最后，4°C，10000×g，離心30分鐘，去除更小的細胞碎片和凋亡小體。

3. 超速離心:
將經過低速離心后的上清液轉移到超速離心管中。
使用超速離心機，在4°C，100,000×g或更高速度，離心70-120分鐘，以沉淀EVs。
小心地吸出上清液，保留沉淀物。
用PBS等緩沖液重懸沉淀物，再次進行超速離心，以進一步純化EVs。
最后，用PBS重懸EVs，并分裝冷凍保存。

4. 純化方法補充:
密度梯度離心:除了超速離心，還可以使用密度梯度離心方法，例如蔗糖密度梯度離心，來進一步純化EVs，基于EVs的密度差異來分離。
免疫磁珠法:使用特異性抗體結合到EVs表面標志物上的磁珠，然后通過磁力分離來富集EVs。
超濾:利用不同孔徑的超濾膜來分離不同大小的EVs。

5. 注意事項:
整個分離過程應在4°C下進行，以減少EVs的降解。
使用無菌的離心管和試劑，避免污染。
在重懸沉淀物時，要輕輕吹打，避免破壞EVs。
分離的EVs應立即冷凍保存，以保持其生物活性

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