懸浮細胞的MTT實驗操作步驟及注意事項-技術前沿-資訊-生物在線

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懸浮細胞的MTT實驗操作步驟及注意事項

作者:上海啟達生物科技有限公司 2024-03-22T00:00 (訪問量:54530)

操作步驟:

1. 將懸浮細胞培養至對數生長期,用PBS洗滌細胞,離心300g,5分鐘。去除上清液,重新懸浮細胞至適當濃度(如1×10^5)

2. 接種細胞:用含10%細胞完全培養配成單個細胞懸液,以每孔1000-10000個細胞接種到96孔板,每孔體積200ul。

3. 培養細胞:在37℃、5%CO2的條件下孵育16-48小時,然后在倒置顯微鏡下觀察。

4. 呈色:取出96孔板,將每孔上清液抽出。每孔加入100ul的預先稀釋好的MTT溶液(5mg/ml,即0.5%MTT),使細胞與mtt試劑充分接觸后,繼續培養4小時,使細胞代謝mtt,形成紫色結晶物;

5. 溶解結晶物:對于懸浮細胞,推薦跳過某些步驟并直接進行離心(1000轉x10分鐘),然后小心吸掉上清液。接著,每孔加入100ul的二甲基亞砜(DMSO),置搖床上低速振蕩10分鐘,使結晶物充分溶解。

6. 比色:在酶聯免疫檢查儀上,選擇OD570nm(630nm校準)測量各孔的吸光值。

Thp-1 cells Line(啟達生物,catlog:CD0122)

K-562 cells Line(啟達生物 catlog:CD0115)

 

注意事項:

6. 實驗環境:確保實驗在無菌、無塵、恒溫(37℃)和恒濕的環境中進行,以維持細胞的最佳生長條件。

7. 溶解結晶物時應充分振蕩,以確保完全溶解。

8.  細胞計數:在接種細胞時,確保準確計數,因為細胞數量直接影響實驗結果。

9. MTT溶液:MTT溶液需現配現用,避免長時間儲存導致活性降低。

10.  避免交叉污染:在操作過程中,注意更換吸頭和管尖,避免不同孔之間的交叉污染。

11.  離心條件:在離心過程中,確保轉速和時間設置正確,避免對細胞造成損傷。

12. DMSO操作:DMSO具有一定的毒性,操作時需佩戴防護眼鏡和手套,確保安全。

8. 結果解讀:OD值的變化反映了細胞的活性,但需注意排除其他可能干擾因素,如培養基的顏色、氣泡等。

9. 實驗記錄:詳細記錄實驗過程中的所有操作和環境條件,以便后續分析和復查。

以上步驟和注意事項完成后,可以確保實驗的準確性和可靠性,從而得到準確的細胞活性數據。

 

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