單克隆抗體的生產(chǎn)
大量生產(chǎn)單克隆抗體的方法主要有三種:1、大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞,從細(xì)胞培養(yǎng)上清液中獲取單克隆抗體,一般細(xì)胞培養(yǎng)液內(nèi)的抗體含量為10~60μg/ml;
2、將對數(shù)生長期的雜交瘤細(xì)胞按1~3×10^7/ml接種于小鼠皮下,每處注射0.2ml,每只注射2~4個點(diǎn),待10~20天左右即可進(jìn)行采血,從血清中獲得的單克隆抗體的含量可達(dá)1~10mg/ml;
3、小鼠腹腔注射適量佐劑后,將雜交瘤細(xì)胞按照1~2×10^6cell/只的量打進(jìn)腹腔。在小鼠瀕死時收集腹水,一般一只小鼠可獲得5~10ml腹水,腹水中單克隆抗體含量可達(dá)5~10mg/ml。
腹水制備實驗流程
1、將佐劑注射BALB/C小鼠腹腔,每只0.3~0.5ml處理腹腔15天左右(一般12-18天)。然后將篩選出來的雜交瘤細(xì)胞株進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)后接種到Balb/c小鼠腹腔內(nèi), 建議每只注射80萬-100萬個細(xì)胞。腹水會比普通佐劑晚出1.5~2天,但通常情況下腹水的量是普通佐劑出量的 1.5~2倍,且單抗腹水效價不變;
2、將篩選出來的雜交瘤細(xì)胞株進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)后接種到Balb/c小鼠腹腔內(nèi), 建議每只注射80~100萬個細(xì)胞;
3、注射細(xì)胞7天左右小鼠腹部會開始腫脹,此時每日都應(yīng)進(jìn)行觀察,以防小鼠突然死亡,當(dāng)小鼠出現(xiàn)進(jìn)食困難,行走不便,毛色暗沉?xí)r將小鼠處死,進(jìn)行一次性腹水的提取;
4、小鼠脫頸椎處死,于75%酒精浸泡消毒5min;
5、用手術(shù)剪將小鼠腹部剪開一個小口,剝離周圍皮膚露出腹腔,隨后將腹腔剪開一個小口,將膠頭滴管伸入腹腔內(nèi)將積液吸取至干凈的15ml離心管內(nèi);
6、3000rpm,10min離心,無色透明的中間層即為腹水。
備注:離心后可以將腹水轉(zhuǎn)移至新的離心管內(nèi)-20℃凍存(上層為礦物油層,下層為細(xì)胞層),也可與滅菌甘油等比混勻后放于-20℃冰箱長期保存。
博奧龍?zhí)厣顾魟?/h2>
| 貨號 | 規(guī)格 | 價格 |
| KX0210048-10 | 10ml | 100 |
| KX0210048-500 | 500ml | 3160 |
備注:大批量采購可享受梯度優(yōu)惠價格
使用方法:
將佐劑注射BALB/C小鼠腹腔,每只0.3-0.5ml處理腹腔15天左右(一般12-18天),然后注射雜交瘤細(xì)胞, 建議每只注射80萬-100萬個。腹水會比普通佐劑晚出1.5天-2天,但通常情況下腹水的量是普通佐劑出量的 1.5-2倍,且單抗腹水效價不變。
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