外周血中嗜堿性粒細胞分離方法（Percoll密度梯度離心分離法）
1、Pcrcoll混懸液的配制：Percoll 90ml,HBSS 9ml, HEPES(0.25mol/l)1ml(PH 7.3),HCL(1mol/l)0.4ml 調節至PH7.4；
2、加分層液的順序：底層先加4ml 1.088g/mlPercoll液，第二層加4Ml1.079g/mlPercoll液，最上層加3ml 1.070g/ml的Percoll液，制成3個密度梯度管，用于分離堿性粒細胞；
3、將新鮮的抗凝血（用0.1mol/EDTA PH 7.7抗凝）按等體積加于Percoll密度梯度分層液上，室溫下1200r/min離心25分鐘；
4、將每一細胞層分別吸出各放于1支試管內，加無Ca,Mg離子的Hanks液在4度下洗滌3次，每次 1200r/min,離心10分鐘棄去上清；
5、將分別得到的各層細胞涂片，固定后用Wright-Giemsa染液染色，在顯微鏡下檢查嗜堿性粒細胞（大多數在中間層，但不同個體嗜堿性粒細胞的密度不同，因此可能會出現在其他細胞層），嗜堿性粒細胞染成紫紅色；
外周淋巴血細胞分離（ficoll密度梯度離心法）
1、肝素抗凝靜脈血，用Hank’s液約等體積或2倍體積稀釋；
2、用滴管輕輕加到 FICOLL上，注意：動作要輕，緩，血液層和FICOLL層的界面要清晰。FICOLL和稀釋后的血的體積比甚至可以達到1：4；
3、離心:溫度為25 度，2000rpm 20分鐘；
4、離心后吸取中間的白色云霧狀狹窄帶（注意不要吸到FICOLL層），置于另一試管中；
5、加入盡可能多的 Hank’s液洗滌吸取的細胞，1600rpm 8分鐘，洗2次；
6、細胞計數，將細胞以一定的濃度種到培養板中，加入營養液培養；
7、分離的時候特別要注意溫度，FICOLL和Hank’s液以及營養液使用之前要37度溫一下；血液層和FICOLL層的界面清晰；FICOLL離心溫度為25度，不能使用離心機上的brake功能。
外周淋巴細胞分離方法
1、5ml 抗凝血緩慢沿壁加到5ml淋巴細胞分離液上（總結經驗用15ml的離心管分離最好，如果血開始保存在4度，記得要回溫到室溫才開始添加）；
2、室溫 500g離心20分鐘（好像離心時間不能過長，過長又會沖開）；
3、取中間云霧狀白色雜帶，置于另一50ml離心管中；
4、25ml PBS洗滌（如果混有紅細胞，在之前可以用紅細胞裂解液，37度裂解5分鐘）；
5、1,000 rmp 離心10分鐘；
6、重復4和5；
7、2ml 10% 胎牛血清+RPMI1640重懸；
8、計數；
9、調整至10ml后培養；
如果要凍存，用凍存液（10%DMSO+20% 胎牛血清+RPMI1640）4℃,1-2h→-20℃,0.5h（這一步時間不能過長，否則冰晶過大，對細胞有害）→-80℃過夜 ，然后液氮中保存。如果，有那種能一度一度降溫的盒子，凍存就好辦了。直接按照它的說明做就行了。
單核細胞分離方法
將用等體積生理鹽水稀釋的抗凝血，加入塑料離心管中的Ficoll Hypaque分離液表面，以450 g離心25min收集單個核細胞，用10 小牛血清的RPMI一1640培養液懸浮細胞，置于6x 6 cm 玻璃培養皿中，在5 ％CO2 、37℃ 下孵育2 h，收集貼壁的單核細胞。用0.2乳白蛋白的RPMI-1 640培養液懸浮單核細胞，Wright染色計數單核細胞<95％，調整細胞密度為4×10／ml。將細胞懸液加入24孔培養板中，在5 ％CO2，37℃ 下培養24 h，離心收集上清液，凍存于一70℃ 冰箱中備用。細胞培養前后臺盼藍染色法測定細胞存活率。
單個血小板的分離和保存
無菌操作下穿刺肘中靜脈取血，取用2% EDTA (1∶9)抗凝新鮮血,經100 ×g離心10 min, 獲得富血小板血漿( PRP) , 經含1 g/L 牛血清白蛋白(BSA ) 的Hepes Tyrodes洗脫液平衡的Sepharose 2B凝膠柱分離純化后得血小板沉淀,然后用TEN緩沖液(0. 05mol/L Tris2HCl, 0. 15 mol/L NaCl, 6 mmol/L ED2TA, pH 7. 4)洗滌3次,最后血小板懸浮于TEN緩沖液中,調血小板密度為1 ×109 /ml,加入終濃度為1 mmol/L 苯甲基磺酰氟( PMSF)和1%的Triton X2100,置于4 ℃冰箱過夜,次日10 000 ×g 離心15min,取上清液為血小板破碎液,分裝, - 20 ℃保存備用。細胞培養前后用臺盼藍染色法測定細胞存活率 。
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