
蛋白Marker,即蛋白分子量標準,是一種由已知分子量的多種蛋白質組成的混合物。其主要作用是在電泳或轉膜過程中指示目標蛋白的位置。然而,面對預染、非預染、不同分子量范圍等多種類型,如何根據實驗目標做出準確選擇,從而確保電泳條帶清晰、轉膜高效并準確定位目標蛋白呢?
a) 作為分子量參照標準,用于判斷目標蛋白的分子量大??;
b) 監測電泳過程的進行情況;
c) 評估Western Blot中的蛋白轉膜效率。
• 預染蛋白Marker
預染蛋白Marker通過染料共價結合形成彩色條帶,其最大優勢在于實時可見性,能夠在實驗過程中提供直觀參考,主要作用包括:
a) 可根據預染Marker的遷移情況,判斷目標蛋白是否進入最佳分離區域,以優化電泳終止時間;
b) 若Marker出現異常遷移,可及時中斷電泳,避免實驗失敗;
c) 轉膜后可直接觀察轉膜是否完全,并在膜上標記蛋白分子量。
然而,由于染料共價修飾可能在不同緩沖條件下影響蛋白質的遷移行為,預染Marker在分子量判定上可能存在一定偏差,因此不適用于精確定位。

| 類型 | 適用場景 |
|
預染 蛋白Marker |
• 目標蛋白分子量近似估算 • 電泳進程實時監控 • Western Blot轉膜效率評估 |
|
非預染 蛋白Marker |
精確測定目標蛋白分子量 |
Q1 Marker是否需全部顯帶?
若說明書標注為7條帶,實際電泳中出現6條帶也屬正常,可能與電泳時間不足有關。若非檢測極小分子蛋白,建議待溴酚藍前沿泳出凝膠后再停止電泳,通常可呈現全部條帶。有時僅顯示5條帶,但只要目標蛋白對應分子量上下兩條Marker清晰可見,即可滿足一般判斷需求,不必強求全部條帶顯現。
Q2 為何不同凝膠體系中蛋白Marker遷移行為存在差異?
在不同SDS-PAGE緩沖系統(如Bis-Tris與Tris-甘氨酸)中,相同蛋白質的遷移率可能發生輕微變化。各緩沖體系pH值不同,會影響蛋白質所帶電荷及與SDS的結合能力,進而改變其電泳遷移行為。此現象在預染蛋白Marker中尤為明顯,因其經化學修飾后對緩沖條件更為敏感。
因此,在使用預染蛋白Marker時,建議根據實際所用的凝膠體系參考對應的表觀分子量,以提高目標蛋白定位的準確性。
• 三色預染寬分子量蛋白Marker (MKPX006)
常規范圍(10-180 kDa),經典適用,條帶清晰易辨。
• 三色預染寬分子量蛋白Marker(MKPX007)
更寬范圍(10-250 kDa),滿足絕大多數蛋白檢測需求。
• 三色預染高分子量蛋白Marker (MKPX010)
覆蓋高分子量區間(25-300 kDa),適用于大分子蛋白檢測。
• 彩虹預染低分子量蛋白Marker (MKPX017)
低分子量范圍(1.2-40 kDa),小分子蛋白與多肽檢測的理想選擇。

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