細胞培養基本分這三類，貼壁細胞， 懸浮細胞和半懸浮細胞，貼壁細胞在科研實驗中占比最大，因而在遇到懸浮細胞的時候通常會覺得這怎么辦？

懸浮細胞顧名思義就是細胞懸浮在培養基中生長，所以在培養的時候一定要在瓶子上做好備注，免得像培養貼壁細胞一樣，一下就給當廢液全棄掉了

懸浮細胞的培養和換液技巧主要包括以下幾個步驟：

1. 準備工作：在進行懸浮細胞培養之前，確保所有實驗器材和材料都已無菌處理。準備培養基、細胞懸液、離心管、移液管、培養瓶等。

2. 細胞接種：將細胞懸液均勻接種到含有新鮮培養基的培養瓶中。注意接種時動作要輕柔，接種密度要保持在35%以上， 避免產生氣泡。

3. 培養條件：將接種好的細胞放置在適宜的溫度和CO2濃度的培養箱中培養。懸浮細胞培養時可以提供培養基在瓶中的比例，懸浮細胞鋪板后，將瓶子在水平面打十字震動，以保持細胞懸浮狀態并且密度均一。

4. 換液和操作：當培養基顏色變黃或細胞密度達到一定水平時，需要進行換液。首先，將細胞懸液轉移到離心管中，以低速離心（通常為1000rpm左右）幾分鐘，使細胞沉淀。去除舊培養基：小心地吸出上層的舊培養基，注意不要擾動細胞沉淀。添加新鮮培養基：向離心管中加入適量的新鮮培養基，輕輕懸浮細胞沉淀。

5. 重新接種：將懸浮好的細胞懸液重新接種到新的培養瓶中，繼續培養。

若懸浮細胞生長比較慢，隔2-3天觀察一次，若培養基無顏色變化，以T25為例，每2-3天可以額外添加250ul-500ul的血清，以滿足細胞營養需求 ，若瓶內液體太多，可以將培養瓶豎起來放置在超凈臺內，待細胞完全沉淀下來，用吸管小心的吸取培養瓶內上層液面培養基，添加500ul新的培養基或者血清。

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懸浮細胞凍存：

懸浮細胞無需胰酶消化，可以直接離心后凍存， 若細胞成團較多較大，可以去除舊的培養基，PBS清洗一次，加胰酶消化1-2分鐘后，輕輕震動培養瓶，待細胞分散后加入完全培養基終止，離心，加凍存液凍存。

在整個過程中，要確保操作的無菌性，避免污染細胞。此外，根據細胞類型和實驗要求，可能需要調整培養基的成分、細胞密度和換液頻率。