細(xì)胞培養(yǎng)基本分這三類，貼壁細(xì)胞， 懸浮細(xì)胞和半懸浮細(xì)胞，貼壁細(xì)胞在科研實(shí)驗(yàn)中占比最大，因而在遇到懸浮細(xì)胞的時(shí)候通常會覺得這怎么辦？
懸浮細(xì)胞顧名思義就是細(xì)胞懸浮在培養(yǎng)基中生長，所以在培養(yǎng)的時(shí)候一定要在瓶子上做好備注，免得像培養(yǎng)貼壁細(xì)胞一樣，一下就給當(dāng)廢液全棄掉了
懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)和換液技巧主要包括以下幾個(gè)步驟：
1. 準(zhǔn)備工作：在進(jìn)行懸浮細(xì)胞培養(yǎng)之前，確保所有實(shí)驗(yàn)器材和材料都已無菌處理。準(zhǔn)備培養(yǎng)基、細(xì)胞懸液、離心管、移液管、培養(yǎng)瓶等。
2. 細(xì)胞接種：將細(xì)胞懸液均勻接種到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中。注意接種時(shí)動作要輕柔，接種密度要保持在35%以上， 避免產(chǎn)生氣泡。
3. 培養(yǎng)條件：將接種好的細(xì)胞放置在適宜的溫度和CO2濃度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。懸浮細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)可以提供培養(yǎng)基在瓶中的比例，懸浮細(xì)胞鋪板后，將瓶子在水平面打十字震動，以保持細(xì)胞懸浮狀態(tài)并且密度均一。
4. 換液和操作：當(dāng)培養(yǎng)基顏色變黃或細(xì)胞密度達(dá)到一定水平時(shí)，需要進(jìn)行換液。首先，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中，以低速離心（通常為1000rpm左右）幾分鐘，使細(xì)胞沉淀。去除舊培養(yǎng)基：小心地吸出上層的舊培養(yǎng)基，注意不要擾動細(xì)胞沉淀。添加新鮮培養(yǎng)基：向離心管中加入適量的新鮮培養(yǎng)基，輕輕懸浮細(xì)胞沉淀。
5. 重新接種：將懸浮好的細(xì)胞懸液重新接種到新的培養(yǎng)瓶中，繼續(xù)培養(yǎng)。
若懸浮細(xì)胞生長比較慢，隔2-3天觀察一次，若培養(yǎng)基無顏色變化，以T25為例，每2-3天可以額外添加250ul-500ul的血清，以滿足細(xì)胞營養(yǎng)需求 ，若瓶內(nèi)液體太多，可以將培養(yǎng)瓶豎起來放置在超凈臺內(nèi)，待細(xì)胞完全沉淀下來，用吸管小心的吸取培養(yǎng)瓶內(nèi)上層液面培養(yǎng)基，添加500ul新的培養(yǎng)基或者血清。
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懸浮細(xì)胞凍存：
懸浮細(xì)胞無需胰酶消化，可以直接離心后凍存， 若細(xì)胞成團(tuán)較多較大，可以去除舊的培養(yǎng)基，PBS清洗一次，加胰酶消化1-2分鐘后，輕輕震動培養(yǎng)瓶，待細(xì)胞分散后加入完全培養(yǎng)基終止，離心，加凍存液凍存。
在整個(gè)過程中，要確保操作的無菌性，避免污染細(xì)胞。此外，根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)要求，可能需要調(diào)整培養(yǎng)基的成分、細(xì)胞密度和換液頻率。