內參是什么？

內參是指在不同細胞或組織間表達相對穩定，且具有高水平表達量的蛋白，通常在Western Blot實驗中比較不同條件下或不同細胞組織中目標蛋白表達量的相對多寡，因此必須先確定上樣量相同，才有比較的基礎。在Western Blot實驗中，可能因總蛋白濃度測定不準確，或是蛋白質上樣時因操作產生誤差，所以必須設置內部參照組來進行校正。而這樣的參照蛋白，就稱為內參，對應的抗體就稱為內參抗體。

內參在Western Blot中的關鍵作用

1、用于校正蛋白水平，確保不同樣品間蛋白定量（上樣量）相同?？蓮臈l帶粗細初步判定上樣量是否有差異；然后，使用影像分析程序將目標蛋白除以內參含量，所得到的數值即為校正后的目標蛋白相對含量，以此進行目標蛋白相對量的比較。

2、確認轉膜轉膜、顯色等步驟是否均勻轉移，呈色。內參一般選用高表達的蛋白，因此可通過內參的條帶，觀察Western Blot實驗過程中的轉膜、呈色等步驟是否有誤。

3、對文章發表絕對重要，增加實驗可信度。

如何挑選合適的內參抗體？

通常選擇在各細胞或組織間穩定表達、并且不受實驗影響的蛋白作為內參，但不同的實驗還是有一些細節要注意，挑選內參可參考下面四點：

1、目標蛋白的分子量。

內參蛋白最好與目標蛋白的分子量有5 kDa以上的差異，在Western Blot實驗中能做區隔。分子量若太過接近，不利后續條帶的分析。例如目的蛋白分子量為34 kDa，則可考慮選擇分子量19 kDa的Cofilin 1，不宜選擇34 kDa GAPDH作為內參。

2、研究的領域

挑選的內參是否會受實驗變化影響？例如GAPDH是常用的內參，但在代謝糖酵解的研究中，可能就不適合做內參；在凋亡實驗時，TBP、Lamin A + C等與凋亡相關的因子也不適合作為內參。內參最好是選擇在正常狀態和病理狀態下表達沒有明顯差異的蛋白，這也是大家最容易忽略的一點。

3、樣本來源

a-哺乳動物來源的組織或細胞樣本，通常選擇β-actin、GAPDH、COX4、Histone H3等。

b-其他來源樣本應該參照文獻，選擇合適的蛋白作為內參，例如植物樣本可用bata actin，Ubiquitin，Rubisco作為內參。

4、是否使用亞細胞萃取?

一般的蛋白檢測常用β-actin、GAPDH抗體等，如針對核蛋白定量，常用的核內參抗體有Lamin B、Histone H3、PCNA。

常用內參的分子量和細胞定位：

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