熱的受不了的高溫假來啦，你的細胞會選擇什么樣的方式入眠靜等高溫假后復蘇呢？

細胞凍存是一項重要的實驗技術，凍存的不好，三天復蘇死光光，凍存得當在液氮里放個5-10年都沒有問題，那么細胞凍存需要注意什么呢？

1. 細胞狀態：

   - 確保細胞狀態良好，生長平穩，成對數生長，無污染、形態良好沒有變異。

   - 選擇匯合度80%-90%左右。處于生長平頂期的細胞進行凍存操作，以確保細胞在凍存時狀態最佳。

- 若細胞進行支原體查殺或者慢病毒感染 ，細胞應傳兩代直到生長對數穩定后再進行凍存。

                                                               免程序凍存液-低血清（啟達生物，貨號：SD0001)

2. 凍存液的選擇：

這個過程很重要，細胞在休眠的時候也會需要少量養分和抗氧化物質，因此正常的凍存液配制，我們都會選擇90%FBS+10%DMSO來凍存細胞，凍存液最好不要現配現用，提前一天配制放4°過夜，據說可以給DMSO去熱源，細胞凍存后我們選擇程序降溫即可（方法見下文細胞的程序降溫）.

啟達生物的低血清凍存液（啟達生物，貨號：SD0001)更加讓細胞凍存更加方便：

它無需程序降溫，細胞凍存后直接放入-80°過夜，24小時移入液氮即可，

它含有2%的血清，含有抗氧化劑和細胞休眠時所細胞的蛋白質和氨基酸，

它只含有5%DMSO,因為DMSO一旦濃度過高會導致細胞在凍存時中毒，復蘇細胞存活少，或者長時間不長。

啟達生物無血清無蛋白凍存液（啟達生物，貨號：SD0002）適用于限制血清干擾的細胞凍存:

它采用氨基酸和維生素替代了血清和蛋白組分，研究發現，IPS或者其他多能干細胞，血液細胞等在含有FBS的環境下長期凍存，復蘇后會出現分化現象，因此在這類細胞的凍存中，我們都建議使用無血清無蛋白組分的凍存液，以維持細胞在休眠時的營養所需.

它也無需程序降溫，凍存后直接放-80°過夜 ，在-80°冰箱細胞可保存1-2個月。

A-375凍存6個月后復蘇24小時形態：

                                                                    其他品牌凍存液

                                                                 啟達生物免程序無血清凍存液（SD0002）

3. 細胞凍存過程：

   - 凍存管的管蓋并不是擰得越緊越好，因為管蓋內有O型橡膠圈，擰得太緊會讓其變形，造成泄漏。當然，太松也會泄漏。

   - 凍存前注意切勿消化時間過長、吹打力度過重、離心轉速過大或離心時間過長，以免造成細胞損傷。

- 凍存細胞不宜密度過大，一般腫瘤細胞株的凍存在1*10^6cell/ml， 巨噬細胞需要1.5-2x10^6cell/ml。神經細胞凍存時因為細胞個頭比較大，通常不好估計數量，而神經細胞復蘇的死亡也很高 ，建議凍存數量在1*10^6cell/ml以上。

                                                      免程序凍存液無血清無蛋白（啟達生物，貨號：SD0002）

4. 細胞程序降溫：

   - 采用“慢凍快融”的方法，標準冷凍速度開始為-1 到 -2℃/min，當溫度低于-25℃時可加速，到-80℃之后可直接投入液氮內(-196℃)。

   - 如果沒有程序降溫盒，則按下列順序依次降溫：室溫→4℃ 20min→-20℃ 30min→-80℃過夜→液氮保存。

若使用的是免程序降溫凍存液，可省略這一步鄹。

5. 長期保存：

   - 細胞冷凍儲存在-70℃冰箱中可以保存一年之久；細胞儲存在液氮中，溫度達-196℃，理論上儲存時間是無限的。

   - 凍存細胞長期保存應放置于液氮，不建議在-80℃長期保存，-80°長期保存會讓您的細胞復蘇存活和狀態都大打折扣。

細胞凍存完成，趁高溫假好好給自己放個假吧