細胞感染細菌模型在病原體與宿主相互作用、抗菌藥物研發與篩選、感染性疾病治療研究、疫苗效果評估與研發以及環境監測與食品安全等多個方面都有廣泛的應用.但是在感染過程中稍不注意出現雜菌或者細胞死亡的現象。
1.將需要感染的細胞復蘇好,待細胞生長平穩并達到90%以上的匯合度;
2.取-70℃保存的標準菌株50μL于5mL的液體LB中,置于37℃水浴恒溫振蕩器中200~300r/min培養12~14h讓其復蘇;
3.將復蘇好的菌群至于瓊脂板上,于37℃溫箱中倒置培養6~10h,然后于無菌條件下挑取單個菌落于5mL LB培養基中,37℃水浴振蕩培養6~10h,配制成4×10^8/mL的菌液;
4.將目的細胞消化,100×g離心5 min后棄上清,再用基礎培養基重懸,稀釋細胞濃度至5×10^4cells/ml并接種到24孔板中,置于37℃5%CO2恒溫培養箱中培養過夜。
5.過夜后用無菌D-HanK′s洗滌3次,每孔加入100ul的菌液感染細胞,并在恒溫恒濕細胞培養箱中相互作用2 h后用無菌PBS洗滌3次,隨后加入1 mL含氯霉素(終濃度34 μg/mL)基礎培養基繼續培養1 h,然后用無菌PBS輕柔洗滌細胞3次,再加入1 mL DMEM繼續培養1、2、4、6、8 h,后用無菌PBS輕柔洗滌3次。
6.再加入無菌水1 mL/孔使細胞完全裂解,稀釋一定濃度后將菌液均勻涂布于LB固體平板上,對細胞內存活的細菌數進行計數。收集感染1、2、4、6、8 h的細胞,攝取率計算方法公式:細胞裂解出的細菌數/感染初始細菌數×100%。每個實驗組重復3次,整體步驟重復3次。
感染模型的檢測方法為:Hoechst33258染色法或Annexin V-FITC/PI雙標記流式細胞術。
1000X支原體清除劑:
1. 采用抗支原體多肽合成劑配制,未發現細胞毒性作用,且治療簡單,可治愈99%以上的細胞支原體感染。
2. 靈活多用 ,稀釋1000倍加入細胞培養兩代可清除支原體 ,稀釋2000倍可預防細胞支原體感染。
1000X黑膠蟲清除劑:
1. 采用小分子抗生素合成配制,對細胞毒性小,殺菌能力強,第二天可看到明顯的效果。
2. 使用方便, 1ml稀釋1000倍即可使用。
檢測步驟不清楚?可以關注我們下期公眾號哦 ,更多細胞實驗操作步驟,盡在啟達生物!
