Western Blot（WB）實驗中，細胞裂解是蛋白樣品制備的第一步，也是影響實驗成敗的關鍵。有效的裂解能完整釋放目標蛋白，并保持其活性與結構，為后續步驟奠定基礎。
蛋白質提取的目的是破壞細胞膜與細胞器膜，將蛋白釋放到溶液中，同時保持其完整性?；驹硎抢没瘜W、物理或機械方法破碎細胞結構。
誤區一：采用“一刀切”的裂解方案
錯誤做法：許多研究者習慣用同一套裂解流程處理所有樣品（如組織、貼壁細胞、懸浮細胞），忽略其結構差異。
原因分析：動物組織柔軟但需研磨；植物細胞有細胞壁需機械破碎；微生物（如細菌）細胞壁成分特殊。若方法不當，會導致裂解不完全或蛋白降解。
正確做法：根據樣品特性選擇破碎方法。例如，動物組織優先用勻漿器研磨，貼壁細胞可直接加裂解液吹打；植物組織則采用珠磨法或高壓勻漿法等機械破碎方法。
誤區二：選錯裂解液
錯誤做法：隨意選用高強度裂解液（如強RIPA），認為“越強越好”，或忽略下游實驗（如Co-IP需避免SDS）。
原因分析：高強度裂解液可能破壞蛋白互作或導致過度變性；而弱裂解液對膜蛋白提取不足。
正確做法：根據目標蛋白的溶解性和實驗目的選擇裂解液。例如：
可溶性蛋白：用中/弱強度RIPA或NP-40裂解液。
膜蛋白或核蛋白：優選強RIPA裂解液。
Co-IP實驗：避免離子型去垢劑，選擇溫和裂解液。
誤區三：蛋白酶抑制劑使用不當
錯誤做法：抑制劑添加不及時（如裂解液配制后久置）、濃度不準確，或忽略磷酸酶抑制劑（用于磷酸化蛋白研究）。
原因分析：細胞裂解釋放的內源性蛋白酶會快速降解目標蛋白；PMSF等抑制劑在水中半衰期短，需現用現加。
正確做法：
現用現配：抑制劑在裂解前1-2分鐘加入，確?；钚?。建議直接使用商品化蛋白酶抑制劑Cocktail，覆蓋譜廣且穩定。
濃度精準：參考蛋白酶抑制劑的工作濃度表，例如PMSF常用0.1-1.0 mmol/L。
誤區四：忽略操作溫度與時間控制
錯誤做法：裂解過程在室溫下進行，或裂解時間過長（如超過30分鐘），認為“時間越久越徹底”。
原因分析：高溫會加速蛋白酶活性和蛋白變性；過度裂解可能釋放基因組DNA，導致樣品粘稠。
正確做法：
全程低溫：操作在冰上進行，裂解液預冷。
時間優化：多數細胞裂解僅需1-2秒，組織需研磨至勻漿；離心步驟在4℃下進行。
注意事項：若裂解產物出現透明膠狀物（基因組DNA），可短暫超聲處理或離心取上清。
誤區五：樣品儲存與處理不規范
錯誤做法：裂解后樣品反復凍融，或未分裝儲存，直接用于長期實驗。
原因分析：凍融循環會破壞蛋白結構，引起聚集或降解。
正確做法：
分裝保存：裂解產物分裝后于-80℃儲存，避免多次凍融。
現用現制備：組織取材后分裝，裂解后盡快用于下游實驗。
| 貨號 | 產品名稱 | 特點 | 適用范圍 |
|
EZPS05-1-100mL |
RIPA裂解液（弱） |
不含SDS，溫和，保持蛋白互作 |
IP、Co-IP、可溶性胞質蛋白 |
|
EZPS04-1-100mL |
RIPA裂解液（中） |
中等強度，通用型 |
常規WB，可溶性及部分膜蛋白 |
|
EZPS03-1-100mL |
RIPA裂解液（強） |
含離子去垢劑，裂解能力強 |
核蛋白、跨膜蛋白等難溶蛋白 |
|
EZPS25-100mL |
植物總蛋白裂解液 |
強效去垢劑+多種抑制劑，防降解 |
植物樣本，適用于SDS-PAGE電泳、WB、質譜分析等。 |
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END
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公司自2016開發了系列電泳類產品，在國內國際市場獲得一致認可，客戶遍布世界著名大學和研究機構。公司堅持以技術創新為先導，打造一流的科技服務平臺和生產基地；同時公司秉承客戶至上的原則，竭誠為生物技術產業提供優質、高效、低成本的技術服務和產品，為生命科學的研究與發展提供強大的支持。
