紫色激光的明亮替代產品 Super Bright 系列染料-技術前沿-資訊-生物在線

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紫色激光的明亮替代產品 Super Bright 系列染料

作者:杭州聯科生物技術股份有限公司 2017-06-23T11:31 (訪問量:7762)


Invitrogen? eBioscience? Super Bright 染料是一系列基于熒光聚合物和串聯物的熒光基團,按照發射波長命名,在紫色激光 (405 nm) 下被激發。這些染料針對在流式細胞分析中使用而進行優化,由于其亮度高,可更好地鑒別模糊種群。


Super Bright 系列染料目前有4種選擇

Fluorophore Fluorophore type Ex/Em
(nm)
亮度(1為最暗,
5為最亮)
建議濾片(nm) Uses
Super Bright 436 Polymer dye 414/436 4 450/50 用于替代Brilliant Violet
421 dye
Super Bright 600 Tandem polymer dye 414/600 5 610/20 用于替代Brilliant Violet
605
Super Bright 645 Tandem polymer dye 414/645 5 660/20 用于替代Brilliant Violet
650 dye
Super Bright 702 Tandem polymer dye 414/702 5 710/50 用于替代 Brilliant Violet
711 dye


Super Bright 436 染料

Invitrogen? eBioscience? Super Bright 436 染料的最大激發波長為 414 nm,發射峰為 436 nm。推薦使用 450/50 帶通濾波器或等效濾波器,與 Invitrogen? eFluor? 450 染料或 Invitrogen? Pacific Blue? 染料近似。Super Bright 436 染料-偶聯物抗體的亮度顯著強于 eFluor 450 染料偶聯物,可替換 Brilliant Violet? 421 偶聯物,具有近似的陽性和陰性種群分辨率。穩定性研究顯示當染色細胞暴露于甲醛固定劑長達三天或在未遮蓋的情況下置于環境光線下過夜,Super Bright 436 染料僅有微小的熒光損失。


圖 1.Super Bright 436 染料性能比較。經 Anti-Ly-6A/E(克隆號 D7)APC 染色的小鼠骨髓細胞以及分別與 Super Bright 436 染料(左圖)、eFluor 450 染料(中圖) 或 Brilliant Violet 421 染料(右圖)偶聯的抗 CD117(克隆號 2B8)。


Super Bright 600 染料

Invitrogen? eBioscience? Super Bright 600 染料是含有 Super Bright 436 染料的串聯染料,是發射波長為 600 nm 的受體染料。可使用 610/20 帶寬濾波器檢測。與這種串聯聚合物染料偶聯的抗體在亮度上和 Brilliant Violet? 605 染料偶聯物具有可比性。Super Bright 600 染料偶聯抗體儲存在甲醛固定劑中時可穩定保存長達三天。

圖 2.多重流式細胞分析實驗。在 Super Bright 染色緩沖液中稀釋正常人外周血細胞,然后用所指示的試劑進行表面染色?;钚约毎ㄊ褂每晒潭ɑ钚匀玖洗_定)被用于確定多種 T 細胞亞群的分析。


Super Bright 染色緩沖液

連同其他聚合物染料,當在同一實驗中使用多種 Super Bright 染料偶聯抗體時,可能發生非特異性染料間相互作用。當發生這一情況時,這些相互作用可能導致意外的種群遷移。在加入 Super Bright 偶聯物前,使用 Super Bright 染色緩沖液 (產品目錄號 SB-4400-42),以減少這一情況,將種群恢復到散點圖中預期的位置。當聯合其他聚合物染料(如 Brilliant Violet 染料)使用 Super Bright 染料時,可使用 Super Bright 染色緩沖液最大程度減少染料間相互作用。Super Bright 染色緩沖液使用配方為 5 μL/次檢測,方便在制備混合液時使用。


注意:Super Bright Staining Buffer is not compatible with UltraComp eBeads microspheres.


圖 3.Super Bright 染色緩沖液減少非特異性聚合物染料相互作用。(A) 人外周血液經抗 CD8a(克隆號 RPA-T8)Super Bright 600 染料和抗 CD4(克隆號 SK3) Super Bright 436 染料染色前,加入流式細胞分析染色緩沖液 (頂部散點圖) 或 Super Bright 染色緩沖液 (底部散點圖)。(B) 人外周血液經抗 CD8a(克隆號 SK1)Brilliant Violet 605 染料和抗 CD4(克隆號 SK3)Super Bright 436 染料染色前,加入流式細胞分析染色緩沖液(頂部散點圖)或 Super Bright 染色緩沖液(底部散點圖)。(C) 人外周血液經抗 CD8a(克隆號 RPA-T8)Super Bright 600 染料和抗 CD4(克隆號 SK3)Brilliant Violet 421 染料染色前,加入流式細胞分析染色緩沖液(頂部散點圖)或 Super Bright 染色緩沖液(底部散點圖)。

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