從單細胞起始的總RNA或mRNA全轉錄本擴增-產品資訊-資訊-生物在線

從單細胞起始的總RNA或mRNA全轉錄本擴增

作者：杭州聯科生物技術股份有限公司 2014-10-03T23:31 (訪問量:6647)

REPLI-g WTA Single Cell Kit能夠在單細胞轉錄本水平上對轉錄調控的影響進行可靠的研究，并允許從單細胞（1–1000個細胞）進行所有轉錄物的均一擴增。專用的緩沖液和試劑經過了獨特的、可控的凈化步驟以防止REPLI-g技術擴增污染的核酸。創新的裂解液可以有效地穩定細胞RNA，以確保所得到的RNA準確地反映體內基因的表達圖譜。所有的酶促步驟已經過專門改進，使得用于cDNA準確擴增的RNA得到高效處理。而擴增步驟則采用創新的多重置換擴增（MDA）技術，序列偏差可以忽略不計。

根據研究需要，QIAGEN針對從單細胞擴增cDNA或純化RNA提供了不同的實驗方案：

蛋白編碼RNA的數量多
擴增富集mRNA的RNA (poly A+)的能力，使REPLI-g WTA Single Cell Kit特別適用于通過NGS研究單細胞轉錄本水平上的轉錄調控影響。產生超過90％的NGS片段的核糖體RNA（rRNA）擴增幾乎完全被消除，可產生有意義的mRNA-Seq數據。

從單細胞擴增mRNA（poly A+）3'端區域：

只擴增帶有poly A +尾巴的mRNA（和其他的RNA），適合于廣泛的應用，包括NGS(RNA-Seq）、real-time PCR和微陣列分析。

從單細胞擴增總RNA：

可擴增完整的轉錄本，包括帶有和不帶有poly A +尾的RNA，lnc RNA和linc RNA。需要注意的是，rRNA也將擴增并且擴增程度很高。如果用序列特異性探針（例如用qPCR或陣列協同工作），擴增的rRNA并不會影響下游應用的結果。如果將擴增的RNA用于RNA-Seq，請注意超過90％的片段來自于rRNA，因此進行全轉錄本測序時必須獲得充足的讀段。

可靠檢測低豐度轉錄本
單細胞分析的挑戰性大，尤其是同一細胞內的轉錄本豐度差異很大時。為獲得準確的結果，應確保全轉錄組擴增時可靠擴增所有轉錄本。REPLI-g WTA Single Cell Kit高度適合于但細胞中轉錄本分析，即便是低豐度轉錄本。對使用REPLI-g技術擴增的轉錄本abl-1進行real-time PCR分析，結果顯示即便是低豐度轉錄本也能在使用該試劑盒擴增后，得以可靠的檢測。

純化RNA的擴增：