細胞凋亡（apoptosis）指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細胞自主的有序的死亡。細胞凋亡與細胞壞死不同，細胞凋亡不是一件被動的過程，而是主動過程，它涉及一系列基因的激活、表達以及調(diào)控等的作用，它并不是病理條件下，自體損傷的一種現(xiàn)象，而是為更好地適應生存環(huán)境而主動爭取的一種死亡過程。
凋亡產(chǎn)生的過程會伴隨有很多特征，比如DNA含量減少，線粒體膜電位丟失，細胞膜磷酯酰絲氨酸膜外翻等。以上每種表現(xiàn)都可以通過靈敏、特異的流式染料和試劑進行檢測。
eBioscience 為我們提供了完整的檢測方案。而且現(xiàn)如今越來越多研究更加關注于某群細胞的凋亡現(xiàn)象，那么流式染色的方案又該如何設計呢？
今天讓我們來揭曉這個答案：
線粒體電化學勢梯度(ΔΨ)喪失是凋亡早期的事件。 JC-1是一種廣泛用于檢測線粒體膜電位(mitochondrial membrane potential)△Ψm 的理想熒光探針，可以用于檢測細胞、組織或純化的線粒體膜電位。
在線粒體膜電位較高時，JC-1聚集在線粒體的基質(zhì)(matrix)中，形成聚合物(J-aggregates)，可以產(chǎn)生紅色熒光；在線粒體膜電位較低時，JC-1不能聚集在線粒體的基質(zhì)中，此時JC-1為單體(monomer)，可以產(chǎn)生綠色熒光。這樣就可以非常方便地通過熒光顏色的轉變來檢測線粒體膜電位的變化。常用紅綠熒光的相對比例來衡量線粒體去極化的比例。
CCCP (carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone)可用于研究線粒體膜電位。JC-1 在線粒體中的積聚依賴于電位，其發(fā)射光從綠色(~529 nm)遷移到紅色(~590 nm)。因此，線粒體去極化時，紅色/綠色熒光強度之比會下降。JC-1 在多種類型的細胞包括肌細胞和神經(jīng)元，以及完整的組織和分離的線粒體中都可以作為線粒體膜電位的指示劑。
在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸只分布在細胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側，細胞發(fā)生凋亡最早期，膜磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內(nèi)側翻向外側，這一變化早于細胞皺縮、染色質(zhì)濃縮、DN**斷化和細胞膜的通透性增加等凋亡現(xiàn)象。
AnnexinV是一種磷脂結合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。因此AnnexinV被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。
碘化丙啶（Propidium Iodide,PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但凋亡中晚期的細胞和死細胞由于細胞膜通透性的增加，PI能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此將Annexin V與PI匹配使用，就可以將處于不同凋亡時期的細胞區(qū)分開來。
因此，將Annexin V與PI聯(lián)合使用時，PI 則被排除在活細胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡細胞（Annexin V+/PI-）之外，而晚期凋亡細胞和壞死細胞同時被FITC 和PI 結合染色呈現(xiàn)雙陽性（Annexin V+/PI+）。
2.1 Annexin V- PI/7-AAD 染色步驟
2.2 Annexin V-Fixable Viability Dyes-可固定的死活細胞染料
2.3 Annexin V-表面/胞內(nèi)染色步驟
詳細步驟可參考附件文件。
相關產(chǎn)品列表：
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