細(xì)胞培養(yǎng)基是人工模擬體內(nèi)環(huán)境以維持細(xì)胞體外生長(zhǎng)的基礎(chǔ)物質(zhì)，通過(guò)提供氨基酸、維生素、碳水化合物及無(wú)機(jī)鹽等必需營(yíng)養(yǎng)，同時(shí)調(diào)節(jié)滲透壓（260-320mOsm/kg）和pH值（7.2-7.4），保障細(xì)胞增殖與代謝功能。細(xì)胞培養(yǎng)基是細(xì)胞培養(yǎng)中不可缺少的營(yíng)養(yǎng)成分，但是最基礎(chǔ)的培養(yǎng)基卻給很多實(shí)驗(yàn)者帶來(lái)了一系列的問(wèn)題。如果細(xì)胞狀態(tài)不好，后續(xù)試驗(yàn)將無(wú)法進(jìn)行，甚至前功盡棄。
培養(yǎng)基常見(jiàn)問(wèn)題
一、如何選用培養(yǎng)基? 選擇培養(yǎng)基沒(méi)有一定標(biāo)準(zhǔn)，有幾點(diǎn)建議可供參考：
1. 建立某種細(xì)胞株所用的培養(yǎng)基應(yīng)該是培養(yǎng)這種細(xì)胞首選的培養(yǎng)基。可以查閱文獻(xiàn)，或在購(gòu)買(mǎi)細(xì)胞株時(shí)咨詢。
2. 根據(jù)細(xì)胞株的特點(diǎn)、實(shí)驗(yàn)的需要來(lái)選擇培養(yǎng)基。如小鼠細(xì)胞株多選1640；進(jìn)行細(xì)胞雜交、基因轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)，可選擇IMDM。
3. 用多種培養(yǎng)基培養(yǎng)目的細(xì)胞，觀察其生長(zhǎng)狀態(tài)，可以用生長(zhǎng)曲線、集落形成率等指標(biāo)判斷，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇最佳培養(yǎng)基，這是最客觀的方法，但比較繁瑣。
4.ATCC（American Type Culture Collection）收集了絕大多數(shù)細(xì)胞的詳細(xì)資料。打開(kāi)ATCC網(wǎng)頁(yè)的Cells and hybridomas鏈接，輸入細(xì)胞名稱就可以搜索ATCC的細(xì)胞數(shù)據(jù)庫(kù)。數(shù)據(jù)庫(kù)中有每一種細(xì)胞的詳細(xì)描述，包括細(xì)胞的來(lái)源，培養(yǎng)和凍存條件，以及相關(guān)文獻(xiàn)等資料。
二、液體培養(yǎng)基可以放-20℃保存嗎？
不可以！因?yàn)樵?20℃下，培養(yǎng)基中的鹽容易析出，培養(yǎng)基融化后，有的鹽可能無(wú)法重新溶解，從而導(dǎo)致培養(yǎng)基滲透壓降低，培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞容易破裂而死亡, 在-20℃下培養(yǎng)基中某些成分可能會(huì)被破壞，特別是完全培養(yǎng)基中的因子不可反復(fù)凍融，其活力會(huì)大大降低甚至失活。
三、新配制的液體培養(yǎng)基能保存多久？
我們建議將新配制的培養(yǎng)基放置于4℃，避光保存盡量在一周內(nèi)使用完畢。培養(yǎng)基越新鮮越好。
四、培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長(zhǎng)期保存嗎？
一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時(shí)，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因?yàn)橐恍┛股睾脱逯械幕境煞衷诮鈨龊缶烷_(kāi)始降解。
五、培養(yǎng)基中是否須添加抗生素？
除了特殊篩選系統(tǒng)外，一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下，培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素。
為防止細(xì)菌、真菌污染，可以加入青霉素-鏈霉素雙抗溶液，其培養(yǎng)基中的終濃度為青霉素100U/ml，鏈霉素為100ug/ml。
產(chǎn)品：CSP006
六、為何培養(yǎng)基保存于4℃冰箱中，顏色會(huì)偏暗紅色，且pH值越來(lái)越偏堿性？
培養(yǎng)基保存于4℃冰箱中， 培養(yǎng)基內(nèi)之CO2 會(huì)逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來(lái)越偏堿性。而培養(yǎng)基中之酸堿指示劑(通常為phenol red) 的顏色也會(huì)隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿的結(jié)果， 將造成細(xì)胞生長(zhǎng)停滯或死亡。若培養(yǎng)基偏堿時(shí)， 可以通入無(wú)菌過(guò)濾之CO2， 以調(diào)整pH 值。如下圖所示：
Fig1。通過(guò)酚紅監(jiān)測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)物中的 pH 值變化。酚紅（酚磺酞）是一種三苯基甲烷染料，用于細(xì)胞培養(yǎng)以監(jiān)測(cè) pH 值變化。隨著 pH 值的增加，它的顏色逐漸從黃色過(guò)渡到紅色和紫紅色。
參考文獻(xiàn)：A Beginner's Guide to Cell Culture: Practical Advice for Preventing Needless Problems
七、培養(yǎng)液pH是怎樣影響細(xì)胞生長(zhǎng)的？
由于大多數(shù)細(xì)胞適宜PH值為7.2-7.4，偏離此范圍對(duì)細(xì)胞將產(chǎn)生有害的影響。各種細(xì)胞對(duì)PH值要求也不完全相同，原代細(xì)胞培養(yǎng)一般對(duì)PH值變動(dòng)耐受差，無(wú)限細(xì)胞系耐受力強(qiáng)。 但總體來(lái)說(shuō)，細(xì)胞耐酸性比耐堿性強(qiáng)一些，偏酸環(huán)境中更有利于細(xì)胞的生長(zhǎng)。因此，配制培養(yǎng)用液時(shí)可把液體的PH值稍微調(diào)的偏酸一些。液體在經(jīng)過(guò)0.1um或0.2um濾膜過(guò)濾時(shí)，PH值會(huì)向上浮動(dòng)0.2左右。以下培養(yǎng)基顏色隨PH變化而變化的圖（圖片來(lái)源于網(wǎng)絡(luò)）：
八、為什么有客戶要求培養(yǎng)基中不含酚紅？
研究表明，酚紅可以模擬固醇類(lèi)激素的作用（特別是雌激素）。為避免固醇類(lèi)反應(yīng)，細(xì)胞培養(yǎng)，尤其是哺乳類(lèi)細(xì)胞時(shí)，用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測(cè)，一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測(cè)時(shí)，不使用加酚紅的培養(yǎng)基。
九、培養(yǎng)基顏色變化的原因？
9.1 培養(yǎng)基顏色變紅，培養(yǎng)基保存于4℃冰箱中，培養(yǎng)基內(nèi)CO2 會(huì)逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來(lái)越偏堿性。而培養(yǎng)基中酸堿指示劑(通常為phenol red)的顏色也會(huì)隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿后再用于細(xì)胞培養(yǎng)將造成細(xì)胞生長(zhǎng)停滯或死亡。培養(yǎng)基偏堿時(shí)，可以通入無(wú)菌過(guò)濾的CO2，以調(diào)整pH值。
9.2 培養(yǎng)基顏色變黃，細(xì)胞在生長(zhǎng)和代謝過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生酸性物質(zhì)，如乳酸，會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基的pH值下降，從而使酚紅指示劑的顏色從紅色變?yōu)辄S色。這一現(xiàn)象通常發(fā)生在細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)度、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被大量消耗、代謝廢物積累的情況下。因此，當(dāng)觀察到培養(yǎng)基顏色變黃時(shí)，可能意味著細(xì)胞已經(jīng)接近或達(dá)到了其生長(zhǎng)周期的末期，需要及時(shí)換液或傳代維持細(xì)胞的正常生長(zhǎng)。
Fig3.圖片來(lái)源于中喬新舟實(shí)驗(yàn)室拍攝
左圖：黃色是培養(yǎng)基終止?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)消耗殆盡的情況；有圖：橘黃色是沒(méi)完全消耗還有營(yíng)養(yǎng)的情況。
9.3 培養(yǎng)基顏色發(fā)黃且渾濁，污染的培養(yǎng)基通常會(huì)迅速變黃或變渾濁（細(xì)菌污染），這種污會(huì)影響細(xì)胞的正常生長(zhǎng)，細(xì)胞狀態(tài)受損乃至漂浮死亡。