細(xì)胞培養(yǎng)人最怕的事：污染突襲！
你是否經(jīng)歷過 —— 精心養(yǎng)了一周的細(xì)胞，突然出現(xiàn)不明顆粒、培養(yǎng)基變渾濁、生長速度驟降？這大概率是細(xì)胞污染找上門了！污染不僅讓前期努力付諸東流，還可能影響實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性，成為科研路上的 “絆腳石”。今天就帶大家全面解鎖細(xì)胞污染防治秘籍，從源頭規(guī)避風(fēng)險(xiǎn)，遇到污染也能冷靜應(yīng)對(duì)～
細(xì)胞污染主要分 4 類
1. 細(xì)菌污染（最常見）
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變渾濁的培養(yǎng)基（圖片來源于網(wǎng)絡(luò)） ? 細(xì)菌污染（圖片來源于網(wǎng)絡(luò)）?
Ø 形態(tài)特征：細(xì)菌的個(gè)體非常小，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，無細(xì)胞核、細(xì)胞器，目前已知最小的細(xì)菌只有0.2 μm。細(xì)菌呈現(xiàn)三種基本形狀：球形（球菌）、桿狀（芽孢桿菌）或彎曲（弧菌、螺菌）。
Ø 污染特征：細(xì)菌污染時(shí)細(xì)胞培養(yǎng)基可能在4-6小時(shí)呈現(xiàn)渾濁，顯微鏡下可見大量細(xì)小的黑色顆粒，細(xì)胞形態(tài)逐漸皺縮、脫落，呈現(xiàn)病怏怏的狀態(tài)。
Ø 解決方案：CSP006, 0513青霉素- 鏈霉素混合溶液
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2. 真菌污染（隱蔽性強(qiáng)）
酵母菌污染（圖片來源于網(wǎng)絡(luò)） 霉菌污染（圖片來源于網(wǎng)絡(luò)）
Ø 形態(tài)特征：常見的真菌主要為酵母菌和霉菌兩大類。酵母菌是單細(xì)胞結(jié)構(gòu)，無菌絲，個(gè)體呈球形、卵圓形或橢圓形，直徑通常在 3～5 μm，呈現(xiàn)出芽生殖的特征; 霉菌呈纖細(xì)的絲狀、管狀結(jié)構(gòu)或絮狀 、絨毛狀的結(jié)構(gòu)。
Ø 污染特征：初期培養(yǎng)基清澈，后期出現(xiàn)白色 / 黃色絮狀沉淀，或鏡下可見絲狀菌絲、孢子，細(xì)胞生長緩慢直至停滯。
Ø 解決方案： CSP007青霉素- 鏈霉素- 兩性霉素B 混合溶液, CSP066青霉素-鏈霉素-新霉素溶液, CSP246真菌/霉菌清除試劑
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3. 支原體污染（“隱形殺手”）
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形態(tài)各異的支原體（圖片來源于網(wǎng)絡(luò)） 被支原體“附身”的HT1080（圖片來源于網(wǎng)絡(luò)）
?Ø 形態(tài)特征：支原體大小為0.15~0.3 μm，在光學(xué)顯微鏡下無法觀察到支原體，需使用電子顯微鏡。支原體形態(tài)各異，有球狀、環(huán)狀、絲狀、分枝狀。
Ø 污染特征：支原體污染的培養(yǎng)基無明顯變化，細(xì)胞逐漸出現(xiàn)形態(tài)異常（如變大、扁平）、增殖變慢，嚴(yán)重時(shí)核質(zhì)比異常。
Ø 解決方案：CSP037支原體清除試劑，CSP201支原體高效預(yù)防試劑
4. 黑膠蟲污染（“神秘殺手”）
黑膠蟲污染視頻1（來源于客戶） 黑膠蟲污染視頻2（來源于客戶）
?Ø 形態(tài)特征：黑膠蟲通常在鏡下呈卵圓狀或球桿狀小黑點(diǎn)，并呈現(xiàn)布朗運(yùn)動(dòng)以及明顯的增殖現(xiàn)象。
Ø 污染特征：培養(yǎng)基一般不渾濁，復(fù)蘇或傳代時(shí)易出現(xiàn)黑膠蟲污染，并且與細(xì)胞呈現(xiàn)此消彼長的現(xiàn)象，嚴(yán)重時(shí)會(huì)造成細(xì)胞裂解和凋亡。
Ø 解決方案：CSP093黑膠蟲清除試劑
預(yù)防為王：5 個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)守住防線
1. 環(huán)境消毒：打造無菌 “堡壘”
Ø 超凈臺(tái)/生物安全柜使用前用 75% 酒精擦拭，紫外照射 30 分鐘；
Ø 實(shí)驗(yàn)室地面、桌面每周用含氯消毒劑/滴露徹底清潔，定期檢測(cè)空氣沉降菌；
Ø 操作時(shí)佩戴一次性手套、口罩，手套接觸非無菌物品后立即更換。
2. 試劑耗材：從源頭把控質(zhì)量
Ø 選擇正規(guī)渠道的培養(yǎng)基、血清、胰酶的相關(guān)試劑；
Ø 耗材（離心管、培養(yǎng)皿、移液管），開封后盡快使用，避免反復(fù)開蓋暴露。
3. 操作規(guī)范：細(xì)節(jié)決定成敗
Ø 所有操作在超凈臺(tái)/生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，避免手臂跨越培養(yǎng)瓶 / 皿上方，移液時(shí)動(dòng)作輕柔，減少氣泡產(chǎn)生（氣泡易攜帶細(xì)菌）；
Ø 不同細(xì)胞系分開操作，使用專用移液管、培養(yǎng)基，避免細(xì)胞交叉污染；
Ø 定期檢查培養(yǎng)箱濕度、CO?濃度，托盤內(nèi)加入無菌水（可加少量抗生素抑制細(xì)菌滋生）。
4. 定期監(jiān)測(cè)：早發(fā)現(xiàn)早處理
Ø 每天觀察細(xì)胞形態(tài)、培養(yǎng)基顏色，懷疑污染時(shí)及時(shí)鏡檢；
Ø 定期進(jìn)行支原體檢測(cè)（PCR 法、熒光染色法），建議每 1-2 個(gè)月篩查一次，新購入細(xì)胞優(yōu)先檢測(cè)。
5. 應(yīng)急處理：污染后別慌！
Ø 輕微污染：若細(xì)胞狀態(tài)尚可，可加入適量抗生素（如青霉素 - 鏈霉素雙抗、支原體清除劑），連續(xù)培養(yǎng) 2-3 代，期間密切觀察，若污染未控制則果斷丟棄；
Ø 嚴(yán)重污染：直接丟棄污染細(xì)胞及培養(yǎng)基，相關(guān)耗材高壓滅菌處理，超凈臺(tái)/生物安全柜、培養(yǎng)箱用酒精 + 紫外徹底消毒，避免污染擴(kuò)散。
?? 預(yù)防為主，防治結(jié)合
細(xì)胞污染防治的核心是 “預(yù)防為主，防治結(jié)合”，規(guī)范操作、嚴(yán)格消毒、定期監(jiān)測(cè)三者缺一不可。若要搶救污染的細(xì)胞，可使用抗生素，但不要過度依賴抗生素，長期使用易導(dǎo)致耐藥性，更不能抱有僥幸心理 —— 一次不規(guī)范操作，就可能讓所有努力歸零！
希望這篇指南能幫大家避開污染 “坑”，讓細(xì)胞健康生長，實(shí)驗(yàn)順利推進(jìn)！