細胞培養人最怕的事：污染突襲！
你是否經歷過 —— 精心養了一周的細胞，突然出現不明顆粒、培養基變渾濁、生長速度驟降？這大概率是細胞污染找上門了！污染不僅讓前期努力付諸東流，還可能影響實驗數據準確性，成為科研路上的 “絆腳石”。今天就帶大家全面解鎖細胞污染防治秘籍，從源頭規避風險，遇到污染也能冷靜應對～
細胞污染主要分 4 類
1. 細菌污染（最常見）
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變渾濁的培養基（圖片來源于網絡） ? 細菌污染（圖片來源于網絡）?
Ø 形態特征：細菌的個體非常小，結構簡單，無細胞核、細胞器，目前已知最小的細菌只有0.2 μm。細菌呈現三種基本形狀：球形（球菌）、桿狀（芽孢桿菌）或彎曲（弧菌、螺菌）。
Ø 污染特征：細菌污染時細胞培養基可能在4-6小時呈現渾濁，顯微鏡下可見大量細小的黑色顆粒，細胞形態逐漸皺縮、脫落，呈現病怏怏的狀態。
Ø 解決方案：CSP006, 0513青霉素- 鏈霉素混合溶液
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2. 真菌污染（隱蔽性強）
酵母菌污染（圖片來源于網絡） 霉菌污染（圖片來源于網絡）
Ø 形態特征：常見的真菌主要為酵母菌和霉菌兩大類。酵母菌是單細胞結構，無菌絲，個體呈球形、卵圓形或橢圓形，直徑通常在 3～5 μm，呈現出芽生殖的特征; 霉菌呈纖細的絲狀、管狀結構或絮狀 、絨毛狀的結構。
Ø 污染特征：初期培養基清澈，后期出現白色 / 黃色絮狀沉淀，或鏡下可見絲狀菌絲、孢子，細胞生長緩慢直至停滯。
Ø 解決方案： CSP007青霉素- 鏈霉素- 兩性霉素B 混合溶液, CSP066青霉素-鏈霉素-新霉素溶液, CSP246真菌/霉菌清除試劑
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3. 支原體污染（“隱形殺手”）
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形態各異的支原體（圖片來源于網絡） 被支原體“附身”的HT1080（圖片來源于網絡）
?Ø 形態特征：支原體大小為0.15~0.3 μm，在光學顯微鏡下無法觀察到支原體，需使用電子顯微鏡。支原體形態各異，有球狀、環狀、絲狀、分枝狀。
Ø 污染特征：支原體污染的培養基無明顯變化，細胞逐漸出現形態異常（如變大、扁平）、增殖變慢，嚴重時核質比異常。
Ø 解決方案：CSP037支原體清除試劑，CSP201支原體高效預防試劑
4. 黑膠蟲污染（“神秘殺手”）
黑膠蟲污染視頻1（來源于客戶） 黑膠蟲污染視頻2（來源于客戶）
?Ø 形態特征：黑膠蟲通常在鏡下呈卵圓狀或球桿狀小黑點，并呈現布朗運動以及明顯的增殖現象。
Ø 污染特征：培養基一般不渾濁，復蘇或傳代時易出現黑膠蟲污染，并且與細胞呈現此消彼長的現象，嚴重時會造成細胞裂解和凋亡。
Ø 解決方案：CSP093黑膠蟲清除試劑
預防為王：5 個關鍵環節守住防線
1. 環境消毒：打造無菌 “堡壘”
Ø 超凈臺/生物安全柜使用前用 75% 酒精擦拭，紫外照射 30 分鐘；
Ø 實驗室地面、桌面每周用含氯消毒劑/滴露徹底清潔，定期檢測空氣沉降菌；
Ø 操作時佩戴一次性手套、口罩，手套接觸非無菌物品后立即更換。
2. 試劑耗材：從源頭把控質量
Ø 選擇正規渠道的培養基、血清、胰酶的相關試劑；
Ø 耗材（離心管、培養皿、移液管），開封后盡快使用，避免反復開蓋暴露。
3. 操作規范：細節決定成敗
Ø 所有操作在超凈臺/生物安全柜內進行，避免手臂跨越培養瓶 / 皿上方，移液時動作輕柔，減少氣泡產生（氣泡易攜帶細菌）；
Ø 不同細胞系分開操作，使用專用移液管、培養基，避免細胞交叉污染；
Ø 定期檢查培養箱濕度、CO?濃度，托盤內加入無菌水（可加少量抗生素抑制細菌滋生）。
4. 定期監測：早發現早處理
Ø 每天觀察細胞形態、培養基顏色，懷疑污染時及時鏡檢；
Ø 定期進行支原體檢測（PCR 法、熒光染色法），建議每 1-2 個月篩查一次，新購入細胞優先檢測。
5. 應急處理：污染后別慌！
Ø 輕微污染：若細胞狀態尚可，可加入適量抗生素（如青霉素 - 鏈霉素雙抗、支原體清除劑），連續培養 2-3 代，期間密切觀察，若污染未控制則果斷丟棄；
Ø 嚴重污染：直接丟棄污染細胞及培養基，相關耗材高壓滅菌處理，超凈臺/生物安全柜、培養箱用酒精 + 紫外徹底消毒，避免污染擴散。
?? 預防為主，防治結合
細胞污染防治的核心是 “預防為主，防治結合”，規范操作、嚴格消毒、定期監測三者缺一不可。若要搶救污染的細胞，可使用抗生素，但不要過度依賴抗生素，長期使用易導致耐藥性，更不能抱有僥幸心理 —— 一次不規范操作，就可能讓所有努力歸零！
希望這篇指南能幫大家避開污染 “坑”，讓細胞健康生長，實驗順利推進！