?腫瘤的發生往往是由于某些原癌基因（oncogenes）或者抑癌基因（tumor suppressor genes）的熱點區域發生了突變?？焖?、簡便地鑒定腫瘤相關基因熱點區域的突變對于腫瘤研究具有重要意義。傳統的設計引物、PCR擴增、構建測序文庫、Sanger測序的方法費時費力，需要花費一個星期以上的時間來完成。
利用Life technologies公司發布的新一代Ion Torrent半導體測序平臺和Ion AmpliSeqTM Cancer Hotspot Panel V2試劑盒?？茖W家們能迅速對50個原癌基因和抑癌基因的207個突變頻發區域進行檢測，從構建文庫到得到分析好的數據僅需10個小時。上海伯豪生物技術有限公司/生物芯片上海國家工程研究中心是國內基因組學領域技術服務的領軍企業，為大家提供完整的腫瘤相關基因篩查服務。
一、上海伯豪Ion Torrent測序服務
Ion Torrent是新一代的測序技術，它的問世給測序技術的應用帶來了激動人心的進展。它采用了半導體技術和簡單的化學試劑進行DNA測序，而不是使用光作為媒介。在半導體芯片的微孔中固定DNA鏈，隨后依次摻入ATCG。隨著每個堿基的摻入，釋放出氫離子，在它們穿過每個孔底部時能被檢測到，通過對H+的檢測，實時判讀堿基。
技術優勢：
- 更準確：系統無激光光源，無化學系統，無照相系統；使用無標記的核苷酸及酶進行測序，本底干擾低。通過對H+的檢測，明顯改善堿基判讀準確性。
- 更快速：標準測序時間僅為2-3小時，24小時之內可完成6-8輪實驗；達Sanger測序方法每天測序通量的數千倍以上；彌補了已有高通量測序方法“無快速測序模式”的缺陷。
- 更靈活：通量為10M，100M和1G芯片可以任意選擇。測序長度可以為35bp、100bp和200bp。
實驗流程：
文庫制備—“油包水”PCR—半導體芯片測序—數據分析
技術原理：
- 脫氧核苷酸分子流過芯片微孔；
- 如果脫氧核苷酸與微孔中的DNA分子互補，則該核苷酸被合成到DNA分子中，并且釋放氫離子，該孔溶液的PH發生變化；
- 感應層檢測到PH變化；
- 感應層將PH變化的化學信息轉變為電壓變化信息；
- 電壓變化信息轉變為數字電子信息。如果DNA鏈含有兩個相同的堿基，則記錄電壓信號是雙倍的。如果堿基不匹配，則無氫離子釋放，也就沒有電壓信號的變化。
二、Ion AmpliSeqTM Cancer Hotspot Panel V2服務
序列捕獲測序能對基因組上某些特定的區域進行分析，但是傳統的序列捕獲測序技術操作復雜，實驗時間長，而且對DNA樣品的數量要求較高。基于Ion Torrent測序儀，life technologies發布了Ion AmpliSeqTM Cancer Hotspot Panel V2試劑盒，利用這款試劑盒科學家們能夠快速完成50個腫瘤相關基因的突變篩察。
實驗原理：
life technologies針對50個腫瘤相關基因的207個常見突變區域設計了引物，在同一個EP管中進行多重PCR擴增。隨后純化擴增產物，利用Ion Torrent進行測序分析。
從構建文庫到拿到分析好的數據，整個過程僅需10個小時。
技術參數：
技術亮點：
- 多重：科研人員不再局限于少數幾個基因，而是能夠同時快速分析50個基因。
- 10ng DNA：樣品起始量低，使得研究人員能挑戰高難度樣品，例如FFPE樣品。
- 1天：整個實驗流程，從樣品到數據分析完畢僅需10小時，其中建庫時間僅需3.5小時。
Ion AmpliSeqTM Cancer Hotspot Panel V2試劑盒所能分析的基因列表
Ion Torrent測序應用案例