
抗體有時會因為非特異的蛋白-蛋白相互作用結合細胞內成分,因為疏水作用結合脂肪,也可能會結合一些細胞表面的抗體受體。比如說,
IgG亞型的抗體會結合細胞表面的Fc受體,如CD16、CD32和CD64等。理想條件下,各種類型的非特異性結合都可以通過蛋白(BSA、牛奶或動物血清)來阻斷。Fc受體的結合則可以通過與含免疫球蛋白的血清預孵育來阻斷。所以一個抗體非特異性相互作用及與Fc受體結合的情況,都可以用無關抗原的相同亞型抗體來比照,即同型對照。那么如何選擇同型對照呢?
1、 一般選擇與一抗的成分完全相同種屬來源、相同亞型和亞鏈、相同熒光標記的抗體。比如抗人的CD56 FITC標記的抗體,成份是MouseIgG1,κ,那么它的同型對照應該是FITC標記的MouseIgG1,κ。
2、如果抗體是組合形式,如純化的一抗+熒光標記的二抗,那么應該選擇一抗的同型對照。比如CD86的純化抗體,成分是Mouse IgG1,κ,它的同型對照是純化的Mouse IgG1,κ,它的二抗PE標記的抗小鼠IgG1。那么染色方式如下:樣本管:純化的CD86+PE標記的抗小鼠
IgG1(二抗)+樣本,同型對照管:純化的同型對照+PE標記的抗小鼠IgG1(二抗 )+樣本。
3、如果沒有找到完全匹配的同型對照,在保持來源相同、熒光標記相同、免疫球蛋白類別相同條件下,優先選擇的順序應該是亞鏈不同--亞型不同。比如,某種的抗體的來源是Mouse IgG2а,κ。如果找不到完全相同的同型對照,那么優先選擇相同熒光標記Mouse IgG2а;如果也沒有找到Mouse IgG2а,那么優先選擇相同熒光標記的Mouse IgG2b;如果最后還是沒有找到Mouse IgG2b,那么選擇相同熒光標記的Mouse IgG2作為同型對照。
?
以下是聯科生物同型對照抗體列表,供選擇。
?
全國熱線:400-6721-600 技術郵箱:tech@liankebio.com
