全球非酒精性脂肪性肝?。∟AFLD）作為全球高發的肝臟疾病，其肝臟纖維化檢測剛需也在持續增長。肝纖維化（HF）是一種臨床上較為常見的肝臟受損后的病理性修復反應，是慢性肝病轉向肝硬化的核心環節。
肝纖維化的發病機制
HF發病的分子機制復雜，肝臟受損引起多種細胞釋放一系列細胞因子，進而啟動下游通路進行信號轉導，活化肝星狀細胞（HSCs）并使其向肌成纖維細胞（MFBs）轉化。MFBs可釋放大量細胞外基質（ECM），進而破壞肝臟正常結構，導致HF的發生發展。HF相關治療靶點仍處于動物實驗階段，尚未應用于臨床[1]。
細胞因子誘導機制
TGF-β：可以調節細胞生長、分化、ECM重構、內皮間質轉化等。在哺乳動物中TGF-β家族包括3種不同的亞型（TGF-β1， TGF-β2和TGF-β3），它們的序列和結構具有較高的相似性（70-82%），在體內也具有相似的生物功能，其中TGF-β1在各種組織中的表達水平、生物活性較好，對纖維化疾病的發展有較大影響[2]。
TGF-β信號通路是促進HSC活化和誘導ECM生成的關鍵信號通路。當肝臟受到損傷因子刺激時，TGF-β通過結合TGFβⅡ型受體(TβRⅡ)開始信號傳導，募集TGF-βⅠ型受體(TβRⅠ)，隨后后者發生構象改變，使下游SMAD2和SMAD3蛋白持續磷酸化為pSMAD2和pSMAD3后與SMAD4形成復合物易位到細胞核結合DNA，調節多個靶基因如αSMA、CTGF的轉錄，最終使HSC活化，并誘導Ⅰ型和Ⅲ型膠原的合成，而SMAD7則抑制該通路[3]。
圖 1 肝纖維化信號傳導通路圖
肝臟纖維化模型構建流程[4]
LX－2 細胞作為應用最廣泛的 HSCs 體外細胞模型之一，因保留著活化HSCs 的關鍵特征，如細胞因子信號傳導、神經元基因表達、維甲酸代謝和纖維形成等，已廣泛應用于肝炎及纖維化的體外研究，同時在成纖維細胞樣表型轉化研究中也發揮重要作用
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LX－2 細胞在含 10% FBS、1% 青-鏈霉素溶液的高糖DMEM 完全培養基中進行常規培養，隔日換液，待細胞生長至 80% ～90%密度時，傳代；
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用胰酶消化處理，收集細胞，以合適密度接種于孔板中培養；
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實驗前用1%血清DMEM饑餓處理24h；
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將細胞分為2組：正常組不做處理，模型組采用10ng/mL TGF-β1(Cat. No.:CA59)誘導LX-2肝星狀細胞活化，培養24h后收集細胞進行模型評估。
注意事項：TGF-β1誘導細胞纖維化過程中，血清饑餓處理、細胞密度、因子濃度和作用時間均影響模型的成功建立。在實驗初始階段建議嘗試不同的細胞密度，誘導濃度和時間以達到最佳效果。文獻中一般采用5–10 ng/mL的TGF-β1進行處理24–48小時，具體可根據細胞響應程度適當調整濃度和處理時間。
纖維化模型評價
纖維化模型常用的評價方法包括檢測纖維蛋白的合成和沉積情況、觀察細胞形態的改變以及測定相關蛋白和基因的表達水平等。通過這些評估方法，可以全面地了解細胞纖維化的發生過程和機制，以下為相關鑒定指標：
形態學變化
LX-2細胞經TGFβ1處理后，形態從多角形或短梭形向紡錘形或梭形變化[5]。
圖2 細胞形態變化[6]
功能學驗證
通過 Transwell 法檢測 LX-2 細胞在 TGF-β1 刺激下的縱向遷移能力，EdU檢測模型組增殖能力顯著提升。
圖3 Transwell 和Edu分別評估LX-2肝星狀細胞的遷移和增殖能力[7]
蛋白/基因水平
采用IF、WB或PCR方法檢測α-SMA和CollagenⅠ在 LX-2細胞中的表達情況，模型組中兩種蛋白的表達均升高；WB檢測TGF-β1/Smad通路中相關蛋白（Smad2，Smad3，Smad7）的表達，TGF- β1 顯著上調了Smad2和Smad3的磷酸化，并且抑制了Smad7 的表達。
圖4 TGF-β1誘導的LX-2細胞標志蛋白(α-SMA和Collagen I)激活[6]
圖5 TGF-β1誘導的LX-2細胞信號通路中相關蛋白（Smad2，Smad3，Smad7）的表達[7]
近岸蛋白提供低內毒素，高純度，高活性，高批間一致性的重組TGF-β1蛋白，該產品榮獲CiteAb引用前100，適用于多種類型細胞培養。此外，公司現有TGF-β相關產品二十余種，也可滿足靶向TGF-β藥物研發、功能評估和質量控制等不同環節的需求。
科研級：Recombinant Human TGF-beta 1(Cat. No.:CA59)
Measured by its ability to inhibit the IL-4-dependent proliferation of TF1 human erythroleukemic cells. The ED50 for this effect is 4-40 pg/ml.
GMP級：Recombinant Human TGF-beta 1(Cat. No.:GMP-CA59)
Measured by its ability to inhibit the IL-4-dependent proliferation of TF1 human erythroleukemic cells. The specific activity of recombinant human TGF-beta 1 is ≥2.0 x 107 IU/mg, which is calibrated against the human TGF beta 1 Standard (NIBSC code: 89/514) .
TGF-β蛋白相關產品
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參考文獻
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[2]Chung J Y, Chan MK, Li JS, et al. TGF-β Signaling: From Tissue Fibrosis to Tumor Microenvironment [J]. Int J Mol Sci, 2021, 22: undefined. doi:10.3390/ijms22147575
[3]魯蘇日古嘎, 劉霆, 朱單單, 等. 肝纖維化相關信號通路及其相應的抗肝纖維化藥物研究進展[J]. 臨床肝膽病雜志, 2022, 38(5): 1161-1164. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.05.039.
[4] Kang H, Seo E, Oh YS, Jun HS. TGF-β activates NLRP3 inflammasome by an autocrine production of TGF-β in LX-2 human hepatic stellate cells. Mol Cell Biochem. 2022;477(5):1329-1338. doi:10.1007/s11010-022-04369-5
[5]王冰瑩,杜鴻.TGF-β1體外誘導肝星形細胞活化中自噬和mTOR通路的變化[J].江蘇大學學報(醫學版),2016,26(02):154-158.DOI:10.13312/j.issn.1671-7783.y160002.
[6] Xu S, Chen Y, Miao J, Li Y, Liu J, Zhang J, Liang J, Chen S, Hou S. Esculin inhibits hepatic stellate cell activation and CCl4-induced liver fibrosis by activating the Nrf2/GPX4 signaling pathway. Phytomedicine. 2024 Jun; 128:155465. doi: 10.1016/j.phymed.2024.155465. Epub 2024 Feb 17. PMID: 38471319
[7]宋安寧,張甜甜,鄭珊珊,等.香紫蘇醇通過調控TGF-β/Smad信號通路抑制肝星狀細胞活化及肝纖維化[J].世界科學技術-中醫藥現代化,2024,26(12):3136-3144.