細胞凋亡概念及其特征
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細胞凋亡（Apoptosis）：也稱細胞程序性死亡（Programmed Cell Death，PCD）， |
細胞凋亡的典型特征： 1）線粒體膜電位的喪失； 2）細胞膜PS（磷脂酰絲氨酸）的外翻； 3）細胞核凝縮和斷裂。 |
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凋亡(apoptosis)
程序性死亡，機體為更好地適應生存環境而采取的一種主動死亡過程。
凋亡研究熱度分析
細胞凋亡與疾病：
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凋亡不足 |
凋亡過度 |
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腫瘤 |
心血管疾病 |
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自身免疫病 |
血液系統疾病 |
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病毒感染 |
重癥肝炎 |
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退行性神經疾病 |
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如老年癡呆癥 |
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帕金森癥 |
細胞凋亡熱點問題：
? 細胞接受胞外信號的刺激啟動凋亡
? 胞內凋亡特異性蛋白酶（如Caspase）的活化
? 線粒體對凋亡的調控
? Bcl-2蛋白家族對凋亡的調控
凋亡分期
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早期事件： ?磷脂酰絲氨酸(PS)外翻
?線粒體受損 ?細胞色素C釋放 |
中期事件： ?Caspase 3/7/8/9活化
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晚期事件： ?DN**段化
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凋亡檢測 —— Annexin V
關鍵技術 9項
1，接種 對數生長
細胞密度通常不超過1×106/ml，以免引起凋亡
2，收集 上清消化全收
因部分凋亡細胞可能懸浮于培養基中，須先收集上清，離心收集沉淀，再消化收集貼壁細胞，合并上清和消化下來的細胞。
3，消化 Accutase
避免因消化過度使PS外翻，造成假陽性。
用eBioscience的Accutase酶替代胰酶，在多種細胞系中得到驗證，對細胞更溫和、長時間消化也沒有影響。
（對凋亡不明顯的實驗強烈推薦）
使用細胞消化液－－實際效果比較
4，陽性質控 聯科 Multisciences
沒有明顯的凋亡，該如何調節補償以及設門？
聯科凋亡試劑盒配備陽性質控液，使補償調節so easy
5, 方案 4管 單雙混合
染色：1, Blank、2, Annexin V、3, PI、4, Annexin V+PI
上機：1, Blank、2, 50%Blank +50%Annexin V、3, 50%Blank +50% PI、4, 50%Blank+50%Annexin V+PI、
5, 50%Blank+25%Annexin V+PI+25%Annexin V
6，電壓 足夠大
大到快要超出邊界。
7，細胞數量 足夠多
多到細胞全部收集。
8，補償 橫平豎直
3、4象限橫平；2、4象限豎直
9，漂亮圖片
黃金分割（三分原則）。
關鍵技術 9項
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1，接種：對數生長 2，收集 ：上清消化全收 3，消化：Accutase 4，陽性質控：聯科 Multisciences 5，方案：單雙混合 6，電壓：足夠大 7，細胞數量：足夠多 8，補償 ：橫平豎直 9，漂亮圖片 ：黃金分割 |
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