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近年來,exosome這種小囊泡正得到廣泛的關注。exosome是直徑約為30-150nm的小囊泡,在30年前被人們所發現。exosome天然存在于所有體液中,包括血液、唾液、尿液和母乳,且其蛋白、RNA和脂肪成分特異,早期的研究認為,exosome執行蛋白運輸功能,特異靶定受體細胞,交換蛋白和脂類或引發下游信號事件。直到2007年,研究人員發現exosome也運輸核酸,參與細胞間通訊。至此,這種小囊泡才被人重視,并成為熱門的研究對象。 |
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細胞外微泡, 運載RNA(包括mRNA、miRNA、lncRNA)、DNA及蛋白質,為細胞間信號交流起著重要作用。QIAGEN exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit大幅簡化細胞外RNA純化,讓您能更快、更準確地了解細胞發出的信息,盡早提出您的生物學見解。 exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit采用親和性膜離心柱,可從exosomes和來自血清或血漿中的其他細胞外微泡中高效分離RNA。Maxi規格的分離柱可處理多達4 ml的大體積樣本,因此能夠可靠檢測低豐度RNA。該試劑盒能夠快速、便利的獲得結果,十分適用于敏感的下游應用。 | |||||
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exoRNeasy純化exosomes和其他細胞外微泡與超速離心法相比,不僅速度更快,并且產物純度更高。掃描電鏡顯示,雖然這兩種純化技術都能夠純化預期大小的完整的囊泡,但超速離心法的產物還含有很多不符合預期的更小、或其他形狀的細胞結構(參見Intact vesicles are eluted from the exoEasy membrane with higher purity compared with ultracentrifugation)。 | |||||
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exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit改進了傳統的超速離心微泡分離方法,能夠在20分鐘內快速純化得到細胞外囊泡。該試劑盒采用Exosome Diagnostics, Inc.公司的技術,通過離心柱和特制緩沖液,從多達4 ml的預過濾血漿中分離exosomes。之后使用QIAGEN miRNeasy技術分離總RNA。整個實驗流程,從血清/血漿樣本到RNA產物,只需1小時。 | |||||
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從細胞外微泡分離RNA的完整實驗包括兩步:純化exosomes和分離RNA(參見The exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit workflow — sample to microvesicles to total RNA in just 1 hour)。 在exosomes純化步驟,預過濾的血漿(不包含大于0.8 μM的微粒)與Buffer XBP混合,加至exoEasay親和性膜離心柱上,結合到柱上。使用Buffer XWP洗滌結合在膜上的囊泡,之后使用QIAzol裂解。 在RNA分離步驟,在QIAzol洗脫液中加入氯仿,回收水相,將其與乙醇混合。包括miRNA在內的總RNA結合到離心柱上,洗滌三次后洗脫。 |
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以上信息來源于QIAGEN官網: | |||||
閱讀原文:http://www.liankebio.com/ProductCenterShow/articleID/2014100001.html
