底物化學發光ECL是Western blot最常用的顯色方法之一，其原理是辣根過氧化物酶在H2O2的作用下，氧化化學發光物魯米諾（Lumino）并發光，在化學增強劑存在下光強度可以增大1000倍，通過在照相底片上感光就可以檢測辣根過氧化物酶的存在。
Fig：ECL發光檢測原理示意圖
ECL法具有操作簡單，靈敏度高，線性范圍廣等特點，現將該方法使用中最常出現的問題以及解決方法匯總如下：
| 現象 | 原因 | 解決辦法 |
| 信號弱或無 | HRP過高引起底物迅速耗竭 | 稀釋一抗/二抗 |
| 抗體-抗原系統敏感性過低 | 提高抗體濃度/蛋白上樣量 | |
| 轉膜不充分/過轉 | 優化轉膜條件 | |
| HRP或底物活性降低 | 測試活性或選用敏感底物 | |
| 高背景 | HRP過高(背景較高) | 稀釋一抗/二抗 |
| 封閉時間不足 | 延長封閉時間4度過夜最好 | |
| 抗體與封閉液有交叉 | 更換封閉液(如3% BSA的TBST) | |
| TBST洗脫不足 | 增加洗脫時間、次數、用量 | |
| 曝光時間過長 | 降低曝光時間 | |
| 抗原-抗體濃度過高 | 降低抗體濃度或蛋白上樣量 | |
| 條帶內無顯影的白點 | 轉膜不良（如有氣泡在膠-膜之間) | 精細操作 |
| 膜平衡不均/油脂污染 | 按說明書平衡膜/戴手套用平頭鑷子持膜 | |
| 膜與X光片間有氣泡 | 顯影前去除氣泡 | |
| 非特異性條帶 | 抗體交叉反應 | 稀釋一抗/二抗 |
| 散在小圓斑 | 封閉液有雜質顆粒 | 靜置牛奶使大顆粒沉淀，僅用上層 |
| 反影(白色條帶,黑色背景) | HRP過高(背景較高) | 稀釋一抗/二抗 |
| 顯影后膜上條帶處變為黃色 | HRP過高(敏感性太高) | 稀釋一抗/二抗 |
聯科生物ECL顯色試劑盒產品特點：
? 高靈敏度的非放射性檢測系統：可檢測低至100fg～1pg的抗原，適用于痕量抗原的檢測。
? 高分辨率：本底極低，即使長時間曝光，背景仍然極低，遠遠優于國產與進口同類產品。
? 半衰期長：信號衰減慢，12個小時以上仍可感光X光膠片。
ECL試劑盒產品列表：
| 目錄號 | 產品名稱 | 規格 | 目錄價 |
| 70-P1421 | Potent ECL Kit | 60ml | 300 |
| 70-P1423 | Potent ECL kit | 500ml | 2000 |
| 70-P1425 | Potent ECL kit | 100ml | 480 |
| 70-P142B | Potent ECL Bulk | 1L | 3600 |
| 70-P142S | Potent ECL Sample | 10ml | 50 |
| 70-U1421 | Ultra ECL kit | 60ml | 360 |
| 70-U1423 | Ultra ECL kit | 500ml | 2400 |
| 70-U1425 | Ultra ECL kit | 100ml | 560 |
| 70-U142B | Ultra ECL Bulk | 1L | 4200 |
| 70-U142S | Ultra ECL sample | 10ml | 60 |
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相關產品
| 目錄號 | 產品名稱 | 規格 | 目錄價 |
| 70-DY01 | 定影粉（1L） | 包 | 20 |
| 70-XY01 | 顯影粉（1L） | 包 | 20 |
| 70-WB001 | X射線攝影暗匣（含高速增感屏）127*178mm | 個 | 480 |
| 70-WB002 | X射線攝影暗匣127*178mm | 個 | 400 |
| 70-WB003 | RB-400高速增感屏127*178mm | 個 | 180 |
| 70-X1111 | KODAK X光膠片 | 100張/盒 | 298 |
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