mRNA疫苗生產過程中，質粒線性化因其相對穩定和成熟的放大生產工藝等優勢成為主流的模板制備方式。在質粒線性化過程中，要求酶切產物必須為5’端突出或平末端，因為如果酶切產生3’突出末端的模板，在體外轉錄（IVT）時，就會增加副產物dsRNA的產生風險，而dsRNA是一類免疫反應的強刺激物，需要嚴格控制，才能保證mRNA疫苗的有效性。因此，酶切效率高，可以產生5’端突出或平末端，且不易在目標序列內出現酶切位點的限制性內切酶，成為mRNA模板制備的必備品之一。
經過不斷驗證與探索，近岸蛋白在原有限制性內切酶產品基礎上，再次推出無動物源性PmeI酶。PmeI酶克隆自門多薩假單胞菌（Pseudomonas mendocina）PmeI基因，其識別位點長達8個堿基，極不容易在目標序列中出現相同酶切位點，實現高效質粒線性化，同時，其產生的線性化質粒為平末端。
5' G T T T ↓ A A A C 3'
3' C A A A ↑ T T T G 5'
PmeI酶切識別位點
有效切割質粒及PCR產物片段
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50μl反應體系中，不同品牌PmeI與1µg 質粒進行雙酶切（質粒序列中含有兩個PmeI酶切位點），37℃孵育1h，質粒被完全線性化。 1：陰性 MK：DNA Marker 2：品牌A 3：Novoprotein |
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50μl反應體系中，不同品牌PmeI與0.5µg短片段（375bp），37℃孵育1h，片段被完全切割。 1：陰性 MK：DNA Marker 2：品牌A 3：Novoprotein |
更多主流限制性內切酶還有酶切后形成5’末端突出結構的XbaI酶，以及IIS型限制性內切酶BspQI、BsaI，其酶切位點在識別位點以外，酶切后可將Poly A結構直接暴露在3’端而不產生冗余的酶切位點殘基，從根本上杜絕多余堿基造成的不確定性。
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5'...T↓CTAGA...3' 3'...AGATC↑T...5' Xbal酶切識別位點 |
5'...GCTCTTC(N)1↓...3' 3'...CGAGAAG(N)4↑...5' BspQI酶切識別位點 |
5'...GGTCTC(N)1↓...3' 3'...CCAGAG(N)5↑...5' Bsal酶切識別位點 |
近岸蛋白在推動mRNA疫苗研發生產過程中不斷探索創新，GMP級限制性內切酶BsaI、BspQI和XbaI，無動物源性PmeI，為客戶提供更多的酶切位點選擇。
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