轉(zhuǎn)錄組測(cè)序樣品的常溫保存—RNAsafety
高質(zhì)量的生物樣品是組學(xué)研究尤其是轉(zhuǎn)錄組學(xué)和個(gè)性化醫(yī)療過(guò)程中臨床檢驗(yàn)順利實(shí)施的前提。生物樣品的保存方式關(guān)系到待檢樣品的質(zhì)量和檢測(cè)的結(jié)果。樣品的適當(dāng)?shù)奶幚怼⒈４娣绞绞亲罱K獲取準(zhǔn)確測(cè)定結(jié)果必不可少的一環(huán)。常溫保存能耗少，環(huán)保，效費(fèi)比較高，是一種有潛力的生物樣品保存方式。
相信給位老師在樣品保存方面也存在不少困擾，小編就給您講講生物樣品的常溫保存方法。
目前生物樣品的常溫保存主要有以下四種方式：
1．福爾馬林固定石蠟包埋（formalin-fixed paraffin embedded, FFPE）保存。該方法是對(duì)動(dòng)物組織及其所包含的生物大分子進(jìn)行常溫保存的較常用的方法。它可使生物大分子發(fā)生交聯(lián)，加上后續(xù)的脫水步驟，整個(gè)過(guò)程破壞了引起核酸和蛋白等大分子降解的酶類的活性，因而被包埋的組織可以在常溫下保存。由于福爾馬林有致癌性，且容易使核酸片段化，目前該方法保存的樣本對(duì)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的應(yīng)用不太友好。采用干式化學(xué)穩(wěn)定基質(zhì)（包括高分子基質(zhì)）也可以保存核酸。
2．FTA （Flinders Technology Associates）濾紙保存。FTA濾紙是一種多孔的纖維素基質(zhì)，經(jīng)由尿酸、非離子表面活性劑或強(qiáng)力變性劑以及螯合劑浸泡處理。當(dāng)樣品加到濾紙上時(shí)，細(xì)胞被裂解，核酸被釋放出來(lái)，吸附在濾紙上。濾紙上的化學(xué)物質(zhì)可使蛋白變性，酶活性喪失。載有核酸的FTA濾紙經(jīng)干燥，可以常溫保存核酸長(zhǎng)達(dá)數(shù)年。
3．冷凍干燥然后進(jìn)行常溫保存。水分是降解酶類作用的條件之一。凍干可去除樣品中的水分，因而抑制酶的作用。以上方法雖然可以對(duì)生物樣本進(jìn)行常溫保存，但是在樣本處理方法，RNA保存質(zhì)量上都有劣勢(shì)。
第4種方法也是我們今天介紹的主角：組織保護(hù)液保存。這是一種簡(jiǎn)便易行的生物樣品處理和保存方式，特別適用于動(dòng)物組織樣品的短期處置。一些硫酸鹽類，在由緩沖劑調(diào)節(jié)的適當(dāng)?shù)膒H值范圍內(nèi)，可使某些核酸酶活性降低或喪失，從而保護(hù)大分子不被降解。這類穩(wěn)定液，可以迅速滲透組織和細(xì)胞，抑制核酸酶活性。將切下來(lái)的組織迅速切成尺寸不大于0.5cm的小塊，沒(méi)入5-10倍的穩(wěn)定液中。對(duì)于RNA來(lái)說(shuō)，樣品可置于室溫（25℃）保存一周，4℃保存一月，-20℃長(zhǎng)期保存。當(dāng)需要分離核酸時(shí)，將組織從穩(wěn)定液中取出，按常規(guī)進(jìn)行后續(xù)操作即可。
上海伯豪生物技術(shù)有限公司開(kāi)發(fā)出的RNAsafetyTM組織RNA保存液，可用于這種類型的保存。
圖1.第一類醫(yī)療器械備案
實(shí)驗(yàn)顯示，它對(duì)組織中RNA的保護(hù)效果明顯（見(jiàn)圖2）。采用RNAsafetyTM這類穩(wěn)定液，無(wú)需采用液氮或干冰轉(zhuǎn)送和運(yùn)輸組織，便于操作，也節(jié)省材料費(fèi)和運(yùn)輸費(fèi)。是值得采用的一種樣品處理和保存方式。
圖2. 用上海伯豪的RNAsafetyTM組織保存液保存大鼠肝臟組織（藍(lán)、紅、綠表示三個(gè)復(fù)本）。室溫放置兩周時(shí)，指示RNA完整性的RIN值仍在合格線（紅線）以上。