THP-1細胞來源的巨噬細胞，具備人源背景、均一性好、培養簡便等優點，被廣泛用于炎癥機制、腫瘤免疫、病原感染及免疫藥物篩選研究。這份精簡提煉的THP-1細胞誘導巨噬細胞方案，帶你精準避坑，誘導極化一步到位！
THP-1細胞
源自急性單核細胞白血病患者外周血的單核細胞，是一種懸浮生長的細胞系。
培養體系
RPMI1640培養基+10%胎牛血清+1%雙抗+0.1%β-巰基乙醇。
形態特征
懸浮的透亮的體積較小的圓形細胞，少數聚團，飽滿且輪廓清晰；
在偏酸性環境中生長較快，即當培養基稍微變黃（呈橘紅色）時。
向M0巨噬細胞分化
PMA誘導方法
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收集狀態良好的THP-1細胞并進行細胞計數； -
調整細胞密度為5×105個/mL，接種至六孔板，每孔加入2 mL細胞懸液； -
向孔中加入終濃度為100 ng/mL的PMA孵育24-48 h。
誘導成功的標志
形態特征：THP-1細胞用PMA誘導后，由懸浮式生長變成貼壁生長，由圓形變成不規則形態；細胞體積增大，細胞核增大明顯，可見大量明顯細胞器，胞膜周圍可見少量突起。
表型特征：F4/80、CD11b雙陽可作為鑒定巨噬細胞成熟的標志蛋白。
向M1/M2巨噬細胞極化
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去除PMA后，用RPMI 1640完全培養基靜息24h后：
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M1極化：加入100 ng/mL的LPS和20 ng/mL的 IFN-γ（Cat#C014)培養24-48 h；
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M2極化：加入20 ng/mL的IL-4（Cat#CX03)和20 ng/mL 的IL-13（Cat#CC89)培養48-72 h；
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細胞鑒定：M1巨噬細胞上調表達CD86，M2巨噬細胞上調表達CD206。
THP-1來源巨噬細胞形態[1]
THP-1細胞極化Q&A
Q1：THP-1細胞培養基中必須要加β巰基乙醇嗎？
β-巰基乙醇是一種常用的培養補充劑，有抗氧化的作用，可減少氧化應激對THP-1細胞的影響。實驗過程可以根據具體的培養時間以及細胞密度而定，如果細胞培養在48 h內可以不用加β-巰基乙醇，如果培養周期較長，細胞密度過大但需要維持細胞狀態時，可適當增加β-巰基乙醇的比例。
Q2：THP-1細胞極化M1和M2時是否需要靜息培養？
一般而言，靜息培養對THP-1細胞極化M1影響不大，THP-1細胞極化M2時靜息培養效果會更明顯。
Q3：THP-1細胞誘導M1和M2時培養基不用加PMA嗎？
THP-1細胞誘導M1和M2時需要先加入PMA誘導極化為M0后，再進行后續M1和M2的培養，后續誘導M1和M2分化時，不需要加入PMA，加入PMA長期作用會促使細胞發生凋亡。
Q4：THP-1細胞誘導M2時，CD206表達低，僅為10%左右怎么辦？
可以進行優化。降低PMA濃度（如100 ng/mL→50 ng/mL）；延長靜息時間至48h；M2極化延長至48-72h。
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參考文獻
[1] Li P, Hao Z, Wu J, et al. Comparative Proteomic Analysis of Polarized Human THP-1 and Mouse RAW264.7 Macrophages. Front Immunol. 2021;12:700009. doi:10.3389/fimmu.2021.700009.