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1.用有效方法誘導凋亡；設一不加誘導的陰性對照。 2.孵育之后收集細胞并用冷的PBS洗滌。 3.制備1×annexin V 結合緩沖液：按10次分析的量計算，加1 mL試劑C到4ml的去離子水中。 4.制備100μg/mL的PI工作液：用45μl 1×annexin V 結合緩沖液稀釋5μl試劑B，剩余可保存備用。 5.再次離心步驟2中收集的細胞，棄去上清，重懸在1×annexinV 結合緩沖液。計數并用上述緩沖液稀釋至約1 × 106 cells/mL。按每次實驗用量100μl準備充分。 6.在每100μl細胞懸液中加入5μl試劑A和1μl步驟4制備的PI工作液。 7. 室溫孵育15min。 8. 孵育結束，加400μl 1×annexin V 結合緩沖液，輕輕混勻后置于冰上。 9.盡快對染色細胞進行分析。可用FL1檢測530nm激發光，FL3檢測>575nm的激發光。細胞群將被分為三組：活細胞顯示弱熒光，凋亡細胞顯示綠色熒光，而死細胞則同時發紅、綠熒光。 10. 可用熒光顯微鏡驗證結果，適用檢測FITC、TRITC或Texas Red?的濾光片檢測。 | |
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| 圖1. Jurkat細胞經10μM喜樹堿處理4h(B)或不處理(A)的流式圖。細胞經喜樹堿處理后，凋亡細胞增多。A=凋亡細胞；V=活細胞；N=壞死細胞。 | ||
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