1. 選擇適當的細胞接種濃度。
一般情況下，96孔培養板的一內貼壁細胞長滿時約有105個細胞。但由于不同細胞貼壁后面積差異很大，因此，在進行MTT試驗前，要進行預實驗檢測其貼壁率、倍增時間以及不同接種細胞數條件下的生長曲線，確定試驗中每孔的接種細胞數和培養時間，以保證培養終止致細胞過滿。這樣，才能保證MTT結晶形成酌量與細胞數呈的線性關系。否則細胞數太多敏感性降低，太少觀察不到差異。
2. 藥物濃度的設定。
一定要多看文獻，參考別人的結果再定個比較大的范圍先初篩。根據自己初篩的結果縮小濃度和時間范圍再細篩。切記！否則，可能你用的時間和濃度根本不是藥物的有效濃度和時間。
3. 時間點的設定。
在不同時間點的測定OD值，輸入excel表，最后得到不同時間點的抑制率變化情況，畫出變化的曲線，曲線什么時候變得平坦了（到了平臺期）那個時間點應該就是最好的時間點（因為這個時候的細胞增殖抑制表現的最明顯）。
4. 培養時間。
200 ul的培養液對于10的4~5次方的增殖期細胞來說，很難維持68 h，如果營養不夠的話，細胞會由增殖期漸漸趨向G0期而趨于靜止，影響結果，我們是在48 h換液的。
5. MTT法只能測定細胞相對數和相對活力，不能測定細胞絕對數。
做MTT時，盡量無菌操作，因為細菌也可以導致MTT比色OD值的升高
6. 理論未必都是對的。
要根據自己的實際情況調整。
7. 實驗時應設置調零孔，對照孔，加藥孔。
調零孔加培養基、MTT、二甲基亞砜。對照孔和加藥孔都要加細胞、培養液、MTT、二甲基亞砜，不同的是對照孔加溶解藥物的介質，而加藥組加入不同濃度的藥物。
8. 避免血清干擾。
用含15%胎牛血清培養液培養細胞時，高的血清物質會影響試驗孔的光吸收值。由于試驗本底增加，會試驗敏感性。因此，一般選小于10%胎牛血清的培養液進行。在呈色后，盡量吸凈培養孔內殘余培養液。