抗體是生物學研究中的最常用的一種工具,廣泛應用于與免疫檢測相關的研究技術中,包括酶聯免疫吸附檢測、免疫印跡、免疫沉淀和免疫組化等。同時,抗體也是臨床監控的重要工具,可用于相關的診斷和治療。

然而,近年來,科學家們發現,抗體相關研究一直存在嚴重的“重現危機”。研究使用的抗體在質量和性能一致性方面存在巨大的差異,對生物醫學研究的可重復性造成了顯著的不良影響。
想要改善這一困境,加強抗體驗證是最有效的途徑之一。然而,遺憾的是,很長一段時間內,業界都沒能建立全面、統一、規范的驗證策略和科學框架。許多研究者呼吁出臺相關的標準,以確保抗體在特異性和質量上的一致性。
國際抗體驗證工作組(International Working Group for Antibody Validation,IWGAV)在Nature Methods上發表了首篇關于驗證抗體特異性策略的提議,確定了五大“支柱策略”(具體如下),用以指導特定應用中的抗體驗證。
1.基因策略:利用CRISPR/Cas或RNAi等技術,將對照細胞或組織中的目標基因敲除或敲低,并檢測這些對照細胞或組織中的相關信號。
2.正交策略:使用非抗體依賴方法對大量樣品進行定量,并檢測基于抗體和非抗體定量間的相關性。
3.獨立抗體策略:使用2種或多種可識別目標蛋白表面不同抗原決定簇的獨立抗體,并通過對比或定量分析確定特異性。
4.標簽蛋白的表達:為內源性目標基因添加親和標簽或熒光蛋白標簽,利用抗體檢測方法可對來自標簽蛋白的信號進行校正。
5.免疫捕獲及質譜分析(MS):免疫沉淀(IP)技術可通過使用與目標蛋白特異性結合的抗體分離出目標蛋白,其與MS分析結合(IP-MS)可識別與純化抗體直接發生相互作用的目標蛋白以及可能與目標蛋白形成復合物的蛋白。
對抗體的驗證可以確保抗體特異性識別目標抗原、性能不受時間影響,并且最終所有使用者都可以根據正確的實驗方案得到相同的結果。IWGAV提出的這一驗證策略初步建議向著驗證抗體特異性和實現研究的可重復性邁出了堅實的一步。
