? ? ? 常見干細(xì)胞制劑主要分為成體干細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞及誘導(dǎo)的多功能干細(xì)胞（ipsc）三類。今天小編要跟大家介紹的是骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（hMSCs）：
骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是一種具有多分化潛能的成體干細(xì)胞，是人們在哺乳動物的骨髓基質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的一種能在體外或體內(nèi)具有分化為成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞的多種分化潛能的細(xì)胞亞群，據(jù)相關(guān)報道稱骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞能分化成心肌、骨骼肌、神經(jīng)細(xì)胞、造血干細(xì)胞、肌腱、肝組織、腎組織和連接組織。它們對骨髓中的造血干細(xì)胞（HSC）不僅有機(jī)械支持作用，還能分泌多種生長因子（如IL-6，IL-11，LIF，M-CSF及SCF等）來支持造血。
2?hMSCs細(xì)胞身份證
3 hMSCs細(xì)胞來源
? ? ? 1999年，Pittenger等首先用單細(xì)胞培養(yǎng)的方法獲得了人骨髓基質(zhì)細(xì)胞集落，又將這些來自一個克隆的細(xì)胞分化為成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞。該細(xì)胞的分化實驗證明了骨髓基質(zhì)中確實存在具有多向分化能力的干細(xì)胞。這些成纖維樣細(xì)胞被稱之為間充質(zhì)干細(xì)胞。近年來科學(xué)家們還發(fā)現(xiàn)除骨髓以外，間充質(zhì)干細(xì)胞廣泛存在于脂肪、皮膚、胎盤、胸腺、滑膜、骨膜、牙髓、骨胳肌、外周血、臍帶血、胚胎肝臟、腦、胰腺、脾、腎等組織中。
4 hMSCs分離方法
? ? ? 目前常用的分離hMSCs的方法主要有全骨髓法和密度梯度離心法，全骨髓法即根據(jù)干細(xì)胞在低血清培養(yǎng)基中有貼壁優(yōu)勢特性，定期換液除去不貼壁細(xì)胞，從而達(dá)到純化及擴(kuò)增MSC的目的。密度梯度離心法即根據(jù)骨髓中各細(xì)胞成分比重的不同，分離單核細(xì)胞進(jìn)行貼壁培養(yǎng)。二者本質(zhì)上無多大區(qū)別。隨著對MSC表面抗原認(rèn)識的深入，又有人利用免疫方法如流式細(xì)胞儀法、免疫磁珠法等對其進(jìn)行分離純化。但經(jīng)過流式或磁珠分選后的細(xì)胞出現(xiàn)了增殖緩慢等一些問題，加之成本較高和技術(shù)的難度，在某種程度上限制了這些方法的廣泛應(yīng)用。
? ? ? 現(xiàn)以密度梯度離心法介紹hMSCs的分離培養(yǎng)方法：
(1) 無菌條件下抽取骨髓液5mL，用等體積PBS稀釋混勻，室溫下1500rpm離心10分鐘；
(2) 棄去脂肪層，將稀釋骨髓液沿離心管壁緩慢加到等體積Ficoll分離液（1.077g/mL）上面，室溫2500rpm離心30分鐘；
(3) 吸取界面白膜狀層的單個核細(xì)胞，用PBS混懸后，室溫1500rpm離心10分鐘；
(4) 棄上清并重復(fù)洗滌2次。
(5) 用含10%FBS的LG—DMEM培養(yǎng)液（或骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞專用培養(yǎng)基）重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為2x105/mL，接種于底面積為25cm2培養(yǎng)瓶中置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)；
(6) 于3天后首次換液，棄去懸浮細(xì)胞后，每2-3天換液一次；
(7) 每日鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)及生長變化，待細(xì)胞生長達(dá)80%-90%融合時，用胰蛋白酶-EDTA溶液（0.25%:0.02%）進(jìn)行消化，按1：2比例進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
? ? ? ? ? ? ? ? ?圖一 分離第 8d
? ? ? ? ? ? ? ? ?圖二 分離第 10d
? ? ? ? ? ? ? ? ?圖三 分離第 15d