研究納入28例來自上海瑞金醫院的晚期PDAC患者，均接受AG化療，無既往化療或靶向治療史。采集36份腫瘤活檢樣本（23份化療前、13份化療后，含8對匹配樣本）和24份配對PBMC樣本，通過RECIST 1.1標準評估化療療效：11例（39.3%）為響應者（部分緩解PR），13例（46.4%）為非響應者（疾病進展PD），4例（14.3%）為穩定疾?。⊿D）。

研究設計與樣本特征

2. 化療對TME的動態重塑

通過單細胞測序共鑒定出19種主要細胞類型（包括腫瘤細胞、免疫細胞、基質細胞等），共120,353個腫瘤細胞和174,141個PBMC細胞。核心發現：① 響應者化療后，惡性細胞和巨噬細胞比例顯著下降，經典樹突狀細胞（cDCs）比例升高；② 非響應者化療后，T/NK細胞比例顯著下降，中性粒細胞比例升高；③ 外周血中，響應者和非響應者的增殖性T細胞比例均升高，提示化療可廣泛激活外周T細胞，但T細胞的功能分化存在差異。

PDAC 化療后配對活檢中 TME 重塑的特征分析

3. 腫瘤細胞可塑性與化療響應的關聯

鑒定出6種腫瘤細胞亞群：3種經典型（FABP1?、SPINK4?、GPX2?）、1種基底樣型（SNCG?）、1種增殖型（MKI67?）、1種中間共表達型（LMO7?）。核心發現：① RNA velocity分析顯示，LMO7?中間型細胞可雙向轉換為經典型或基底樣型；② 化療前，響應者中GPX2?經典型細胞比例更高，非響應者中SNCG?基底樣型細胞比例更高；③ 化療后，響應者腫瘤細胞向經典型轉換，非響應者向基底樣型轉換，且非響應者的惡性細胞總數增加144.01%，響應者減少至預處理水平的28.16%

化療療效相關的惡性細胞轉化

4. 巨噬細胞亞型與化療耐藥的關聯

鑒定出6種巨噬細胞亞型（IL1B?、ISG15?、MARCO?、SPP1?、FOLR2?、ALDH1A1?），其中SPP1? TAMs與化療耐藥密切相關，FOLR2? Trms與化療敏感相關。核心發現：① 與正常胰腺組織相比，PDAC組織中SPP1? TAMs增多、FOLR2? Trms減少；② 化療后，響應者中FOLR2? Trms顯著增加、SPP1? TAMs減少，非響應者則維持高比例SPP1? TAMs；③ 配體-受體分析顯示，SPP1? TAMs與SNCG?基底樣細胞通過MMP9-CDH1、VEGFA-AXL等通路相互作用，促進耐藥；FOLR2? Trms與GPX2?經典型細胞通過TNF-TNFRSF21等通路相互作用，增強化療敏感性。

巨噬細胞亞型與化療耐藥的關聯

5. CD8? T細胞耗竭與化療耐藥的關聯

鑒定出多種CD8? T細胞亞群，包括耗竭型T細胞（Tex，分為GZMK?過渡耗竭型和終末耗竭型）、組織駐留記憶T細胞（Trm）、終末分化效應記憶T細胞（Temra）等。核心發現：① 化療后，非響應者中GZMK?過渡耗竭型T細胞、終末耗竭型T細胞比例顯著升高，響應者中Trm和Temra比例升高；② 響應者的Temra細胞出現克隆擴增，且新增T細胞克隆以細胞毒性Temra為主，提示化療可誘導新的抗腫瘤T細胞應答；③ 非響應者中，CD8? T細胞的耗竭評分升高、細胞毒性評分降低，且GZMK?過渡耗竭型T細胞可能成為免疫檢查點阻斷（ICB）的潛在靶點。

CD8? T細胞耗竭與化療耐藥的關聯

6. CD276/B7-H3的雙重調控作用及靶向價值

CD276/B7-H3在SNCG?基底樣細胞和LMO7?中間型細胞中高表達，且在非響應者中表達顯著高于響應者，化療后表達進一步升高。核心發現：① 體內外實驗證實，敲低/敲除CD276可促進腫瘤細胞向經典型轉換，抑制基底樣型標志物表達；② 靶向CD276可增強CD8? T細胞的細胞毒性，減少T細胞耗竭，降低SPP1? TAMs的血管生成能力；③ 動物實驗中，CD276抑制劑聯合AG化療可顯著抑制腫瘤生長，延長KPC小鼠的生存期，且無明顯毒性。

靶向治療 PDAC 中CD276/B7-H3逆轉化療耐藥性