ELISA實驗靈敏度高，特異性強(qiáng)，儀器單一，在生物科研上得到了廣泛的認(rèn)可。但在實驗中，若不注意實驗操作過程中的各個環(huán)節(jié)，可能會對最終實驗結(jié)果產(chǎn)生比較大的影響，比如顯色弱靈敏度低、背景高、白板等現(xiàn)象。聯(lián)科生物對以上實驗現(xiàn)象進(jìn)行一一解析及解決方案。這章節(jié)討論背景深（通常ELISA背景OD值<0.2），整板有顏色，可能的原因及解決方法：
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序號
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可能原因
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解決方法
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1
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ELISA板子不正確的貯存
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酶標(biāo)板貯存于2-8 ℃；使用結(jié)合力低點的ELISA板。
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2
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沒有正確封閉
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在標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液中加入動物蛋白或延長封閉時間。
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3
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不正確的孵育時間，溫度（尤其是底物孵育的時間）
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最為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～ 8℃。完全按照說明書要求。
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4
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偶聯(lián)抗體（streptavidin-HRP）濃度過高
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按照說明書調(diào)整到最佳的濃度。
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5
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洗滌不充分，洗后未拍干，樣品中其它成分殘留或酶標(biāo)記物殘留
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洗液準(zhǔn)確配制；充分洗滌，靜置15秒，徹底拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用，不要反復(fù)使用，否則易造成污染。
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6
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底物污染，未避光保存，出現(xiàn)顏色
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棄去底物，重新配置。
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7
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樣品稀釋液污染
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棄去稀釋液，重新配置。
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8
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吸頭重復(fù)使用，未洗凈或消毒不徹底
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吸頭盡可能一次性使用。
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9
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樣本溶血嚴(yán)重
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建議使用非溶血或輕微溶血樣本，嚴(yán)重溶血樣本會導(dǎo)致背景偏高。
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綜上所述：在ELISA實驗中應(yīng)注意以下問題：
? 在實驗前應(yīng)該按相關(guān)要求將實驗試劑平衡至室溫；
? 樣本不要溶血，不要反復(fù)凍融；
? 各試劑在使用前應(yīng)充分混勻，以保證試劑的均一性和準(zhǔn)確性；
? 嚴(yán)格控制反應(yīng)溫度和反應(yīng)試劑；
? 相關(guān)濃縮液應(yīng)按說明書要求稀釋到相應(yīng)比例方可使用；
? 洗板次數(shù)，洗板液的量，洗板液浸泡時間的長短，按說明書操作；
? 在終止反應(yīng)時盡量避免微孔中存有氣泡；
? 終止反應(yīng)完成后應(yīng)該在2min內(nèi)完成酶標(biāo)儀讀數(shù)。