近年來，隨著細胞與基因治療在腫瘤攻克上表現出顯著療效，特別是圍繞T細胞展開的CAR-T、TCR-T、TIL等療法發揮出了優良的腫瘤殺傷效果，因此T細胞療法市場迎來了大幅的增長趨勢。T細胞體外擴增與激活是核心環節，而CD3/CD28抗體偶聯磁珠憑借其高效性和穩定性，成為行業主流選擇。
T細胞激活通路——雙信號機制
01 第一信號：抗原特異性信號
T細胞受體（TCR/CD3）識別抗原呈遞細胞（APC）表面的MHC-抗原肽復合物，觸發下游信號傳導（如鈣調蛋白、MAPK、NF-κB通路），啟動T細胞活化。
02 第二信號：共刺激信號
APC表面的CD80/CD86與T細胞CD28結合，增強TCR信號，促進IL-2分泌和抗凋亡蛋白Bcl-xL表達，防止T細胞失能。
T細胞活化增殖信號通路圖[1]
磁珠激活法原理與優勢
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雙信號同步提供：通過將抗CD3和抗CD28抗體偶聯至磁珠表面，同時提供T細胞活化的第一信號和第二信號，模擬天然抗原呈遞細胞（APC）的雙信號激活模式 -
促進免疫突觸形成：磁珠的直徑一般與APC大小相近，能促進T細胞與磁珠形成類似免疫突觸的結構，增強信號傳導效率 -
動態接觸：磁珠可自由移動，與T細胞表面受體動態結合，避免固定化抗體因空間位阻導致的信號弱化
近岸蛋白為CGT客戶提供GMP級CD3/CD28 beads(Cat.No.:GMP-B016)，選用直徑為 4.5μm的無孔單分散超順磁性微珠，易于磁化和退磁，操作簡便易去除，確保無磁殘留風險；本產品采用人源化抗體原料，為人源化的 anti-CD28抗體，以及OKT3經人源化改造而成的Anti-CD3抗體，且均經過細胞庫檢定和病毒清除驗證，極大降低免疫原性，提高T細胞療法臨床應用安全性。
產品優勢
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14天擴增倍數達1000倍以上
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4.5μm超順磁性微珠，操作簡便易去除，無磁殘留風險
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偶聯的抗體為人源化抗體，更低的免疫原性，均經過細胞庫檢定和病毒清除驗證
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低內毒素，小于0.5 EU/mL
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GMP級別，高批間一致性
數據展示
14天擴增倍數可達1000倍以上，高于國內外同類市場產品
Expansion of the human PBMCs. Cells were stimulated with Anti- Human CD3/CD28 Beads (Cat.No.:GMP-B016) , and expanded for 14 days.
激活第5天，細胞活化增殖占比99%以上
The human PBMCs were labeled with CFSE and stimulated with Anti- Human CD3/CD28 Beads (Cat.No.:GMP-B016), and then the proliferation of cells was assessed with CFSE dilution assay by flow Cytometry on day 5 after stimulation.
激活后T細胞耗竭程度低，在 PD-1 低表達情況下可擴增 8 天
PD-1 expression of the activated human T Cells. The human T cells were stimulated with Anti- Human CD3/CD28 Beads (Cat.No.:GMP-B016), and expanded for 14 days.
使用建議
（1）（可選）磁珠清洗：磁珠重懸后，取適量的磁珠到新的無菌 EP 管中，加入 1mL PBS (pH7.4)重懸，混合 3-5min，置于磁力架上分離磁珠 1min，去掉上清，加細胞培養基重懸待用；
（2）細胞激活：將洗好的磁珠加入到已分離的 PBMC 或T細胞中，重懸到1-2×106/mL確保按照說明書推薦用量添加磁珠（見磁珠推薦使用表），置于 37℃，5%CO2培養箱培養，并添加 rhIL-2（Cat.No:GMP-C013）*或rhIL-7（Cat.No:GMP-C086） + rhIL-15（Cat.No:GMP-C016）擴增；
*單獨添加IL-2，建議使用濃度為100ng/mL，可根據實際反應體系進行調整及優化。
（3）細胞擴增：細胞密度超過 2.5×106/mL 或者培養基變黃時，將細胞轉移到更大的培養器皿中并用新的含有IL-2或IL-7+IL-15的培養基稀釋到0.5-1×106/mL，并記錄細胞活率及擴增倍數，培養 14-21 天后收集細胞。
磁珠Q&A
Q1: GMP-B016只能激活T細胞嗎，能否直接激活PBMC？
A1: 可以直接激活PBMC，并且激活14天后T細胞的占比達到95%以上。
Q2：磁珠是否具備分選功能？
A2：不具備分選功能
Q3：磁珠是否會影響流式檢測？
A3：首先，磁珠原材料采用超順磁顆粒，在非磁場條件包括流式檢測條件下不具備磁性不會堵塞流式機器液路；其次，磁珠尺寸均一為4.5um，低于白細胞大小，在流式前側向分布能夠和細胞顯著區分。
Q4：激活前后細胞形態變化？
A4：細胞活化除了通過活化表型檢測，在細胞形態上也會有顯著變化，激活后的T細胞尺寸變大，發生抱團，未抱團的細胞也會變成近水滴狀。
Q5：磁珠如何去除，如何判斷殘留？
A5：將細胞磁珠混合液置于離心管中并放在磁力架上靜置1min，保持離心管在磁力架，用移液槍吸出細胞懸液。磁珠和細胞在顯微鏡下可顯著區分，亦可在流式機器上區分。
方法一：顯微鏡觀察
方法二：流式檢測
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相關產品信息
| Cat.No. | Product Name |
| GMP-B016 | anti-Human CD3/CD28 Beads |
| GMP-A018 | Recombinant anti-Human CD3 mAb |
| GMP-A063 | Recombinant anti-Human CD28 mAb |
| GMP-C013 | Recombinant Human IL-2,DMF Filed |
| GMP-CD66 | Recombinant Human IL-2 |
| GMP-CD47 | Recombinant Human IL-7,DMF Filed |
| GMP-C086 | Recombinant Human IL-7 |
| GMP-C016 | Recombinant Human IL-15,DMF Filed |
參考文獻
[1] Demkes, Evelyne J et al. “Requirements for Proper Immunosuppressive Regimens to Limit Translational Failure of Cardiac Cell Therapy in Preclinical Large Animal Models.” Journal of cardiovascular translational research vol. 14,1 (2021): 88-99. doi:10.1007/s12265-020-10035-2