小白必看2 | 常見蛋白質組學技術流程匯編-技術前沿-資訊-生物在線

小白必看2 | 常見蛋白質組學技術流程匯編

作者:上海阿趣生物科技有限公司 2021-08-04T11:05 (訪問量:10704)

非靶向蛋白質組學

1. iTRAQ/TMT 標記定量蛋白質組學

iTRAQ 和 TMT 技術采用多種同位素標記,可與氨基反應實現連接,實現多個樣本蛋白組的定性與定量。

技術流程:

寄樣要求:

動物及臨床組織標本 100 mg/sample

血清、血漿 200 μL/sample

細胞、微生物 1x107 cells/sample

植物嫩葉、嫩芽 500 mg/sample

植物種子、果實 100 mg/sample

液氮或者 -80℃ 保存

足量干冰運輸,避免反復凍融

試劑盒種類:

技術優點:

適用范圍廣、高通量、結果可靠

靈敏度高

分離能力強

自動化程度高

2. Label Free 非標記定量蛋白質組學

Label Free 技術不依賴同位素標記,可通過液質聯用對蛋白質酶解肽段進行分析,分析大規模鑒定蛋白質時所產生的質譜數據,對被檢測到的離子峰強度進行積分,以積分面積進行相對定量。

技術流程:

技術優點:

無需標記,最da程度的保留樣本的真實性

可以區分“有”、“無”蛋白

不受標簽數量的限制,多個樣本可以同時進行蛋白定量分析

不同物種和不同的樣本類型可以同時開展蛋白定量分析

處理步驟簡單,成本低

技術缺點:

低通量

定量準確度有限

對質譜的穩定性和重現性有很高的要求

3. DIA 定量蛋白質組學

數據非依賴性采集(DIA)是一種顯著提升蛋白質組學研究通量和可重復性的技術。

經典的 DIA 流程通常依賴于 DDA 譜圖庫的構建,需要消耗大量的樣品,且周期長,成本高。

越來越多的不依賴于 DDA 建庫的分析方法相繼誕生,例如 DIA-Umpire、PECAN 和 encyclope DIA 等。encyclope DIA 系列技術采用氣態在線分離(GPF)。

GPF-DIA 技術流程:

常規 DIA 流程:

技術優點:

采集所有離子及碎片圖譜,重現性好

基于碎片離子定量,選擇性好,可媲美 SPM/MRM

循環時間固定,掃描點數均勻,定量準確度高

高通量,能同時監測所有目標蛋白

4. 定性鑒定蛋白質組學

利用液相色譜質譜聯用技術(LC-MS/MS)結合數據庫檢索的方法,對樣本中的混合蛋白進行定性鑒定分析。

技術流程:

寄樣要求:

  • 膠條樣本

考馬斯亮藍染色 SDS-PAGE 凝膠,條帶清晰可見

條帶切取操作過程中佩戴手套,防止角蛋白污染

條帶置于 EP 管中,-20℃ 保存,冰袋運輸

  • 蛋白溶液

需要提供緩沖液體系以及蛋白濃度數據

蛋白溶液樣本中不要加入 loading buffer

液氮或 -80℃ 保存

足量干冰運輸,避免反復凍融

5. 多肽組學

多肽組學是以機體內源性多肽和低分子量蛋白質為研究對象,研究多肽組的結構、功能、變化規律及其相關關系。

技術流程:

技術優點:

高效

高通量

高特異性

破壞度小

高靈敏度


靶向蛋白質組學

(PRM 靶向定量蛋白組)

平行反應監測(PRM)是一種靶向檢測方法,能夠對目標蛋白、目標肽段進行選擇性檢測,從而實現對目標蛋白/肽段進行相對(絕對)定量。

技術流程:

技術優點:

不依賴抗體

特異性

結果準確、可靠

高通量

修飾蛋白質組學

利用 LC-MS/MS 結合數據庫檢索的方法,在搜庫時設置修飾搜庫參數,實現對目標所有已知的修飾位點磷酸化、乙?;?、糖基化和泛素化進行鑒定。

技術流程:

蛋白代謝互作組

代謝物-蛋白質相互作用控制著多種細胞過程,從而在維持細胞穩態中發揮重要作用。MetPro 技術是一種化學蛋白質組學方法,將蛋白質水解(Lip)和質譜(MS)結合起來。用于進行代謝物-蛋白質相互作用的研究,篩選與代謝物具有相互作用的蛋白質。

技術流程:

蛋白組生信分析

1. 基礎分析

數據預處理

差異表達蛋白篩選

2. 常規數據分析


主成分分析


火山圖分析


層次聚類分析

3.功能分析


COG 注釋分析


亞細胞定位分析


GO 注釋富集分析


KEGG 注釋富集分析


PPI 網絡構建分析

4.修飾蛋白特有分析


Motif 分析


激酶(kinase)預測分析

上海阿趣生物科技有限公司 商家主頁

地 址: 嘉定區新培路51號焦點夢想園5層

聯系人: 高小姐

電 話: 400-664-9912

傳 真:

Email:marketing@biotree.cn

相關咨詢

Circulation (IF=38.7)|上海兒童醫學中心張浩/劉一為聯合南京鼓樓醫院王東進團隊破解肥胖心衰患者LVAD療效困局,胰島素增敏劑點亮心肌恢復新希望! (2026-04-25T00:00 瀏覽數:7889)

J. Adv. Res. (IF=13)|血漿蛋白質組學賦能:暴發性心肌炎精準診斷與靶向治療新突破 (暫無發布時間 瀏覽數:7440)

NP(IF=8.1)|西北農林研究團隊解碼黑枸杞“高品質密碼”:光響應轉錄調控網絡如何驅動類黃酮合成與藥用活性? (暫無發布時間 瀏覽數:7454)

LWT(IF=6.6)|四川大學研究團隊通過同位素標記代謝流與脂質組學的“夢幻聯動”,帶你看清酵母的耐鹽策略 (暫無發布時間 瀏覽數:8122)

破微量極限,啟代謝新程|微量NGM 3 Pro,以微量樣本,全景解碼生命代謝 (暫無發布時間 瀏覽數:8156)

JEP (IF=5.4)|福建中醫藥大學研究團隊:多組學揭秘丹瓜方調控GLUD1改善糖尿病代謝機制 (暫無發布時間 瀏覽數:9383)

Food Chem.(IF=9.8)|南農陳暄教授研究團隊多組學揭秘:云南“金花茶”的風味煉金術—匍匐散囊菌如何點“茶”成“香”? (暫無發布時間 瀏覽數:9650)

J.Agric.Food Chem.(IF=6.2)|中國熱科院胡偉/丁澤紅團隊突破性成果!解碼木薯塊根3類蛋白修飾圖譜,解鎖淀粉積累與抗逆調控密碼 (暫無發布時間 瀏覽數:9838)

nat commun(IF=15.7)|北大白玉教授團隊突破靜態局限:動態單細胞代謝組學揭秘腫瘤-巨噬細胞互作新機制 (暫無發布時間 瀏覽數:11413)

nat.commun.(IF=15.7)|復旦大學附屬中山醫院詹成團隊:靶向多胺代謝提升KRAS靶向藥療效 (暫無發布時間 瀏覽數:12661)

ADVERTISEMENT