從福爾馬林固定石蠟包埋(FFPE)組織中提取基因組DNA是分子診斷的第一個關鍵步驟。蠟片中穩定的基因組DNA含量有利于衡量FFPE提取試劑盒的效率,及FFPE提取流程的精確性,重復性,穩定性。
菁良基因基于自身蠟塊包埋高度均一性及穩定的生產工藝,在制作過程確保每個部分包含相同的細胞數量,生產出基因組DNA含量穩定的FFPE切片,是分析FFPE切片DNA提取效率的理想材料。
菁良基因在近期推出的“腫瘤SNV 5%FFPE標準品”中隨機挑選了幾個批次的FFPE切片產品,送給8家客戶進行提取效率的驗證。
每片產品中包埋的細胞數目大約是390,000個,基因組DNA含量大于400ng(采用推薦提取試劑盒)。
如下圖所示,8家客戶及菁良本身使用的共6種提取kit,分別從一片FFPE標準品中提取的gDNA含量分布。
(從FFPE切片中提取出基因組DNA含量分布)
說明
以上圖標從左至右數據依次為:
左一:菁良基因使用Promega Maxwell LEV Plus FFPE DNA Extraction
kit從30片“腫瘤SNV 5%FFPE標準品”提取出來基因組DNA的平均值。
左二:客戶A使用Life生產的“RecoverAll Total Nucleic Acid Isolation Kit(AM1975)”的提取結果。
左三、四、五、六:客戶B、C、D、E分別使用凱杰生產的“QIAamp DNA FFPE Tissue Kit (56404)”提取試劑盒,提取量從200ng到800ng不等。
右三:客戶F使用新百基生產的“石蠟包埋組織切片DNA提取試劑盒(M2015-01)”的提取結果。
右二:客戶G使用艾德生物生產的“核酸提取試劑(型號:FFPE DNA)”的提取結果。
右一:客戶H使用美基生物生產的“核酸提取或純化試劑(IVD3101)”來進行提取。
從數據圖中我們可以看出,即使其中有四家客戶同時使用了凱杰生產的“QIAampDNA FFPE Tissue Kit (56404)”提取試劑盒,提取量也從200ng到800ng不等。
這表明由于提取過程引入的操作人員,操作流程,操作環境等各種因素的影響,目前市面上各公司提取流程的效率有待驗證,部分公司的提取流程有待優化。
右一、右二兩個數據來自國內企業生產的提取試劑盒,其表現力也不輸Promega、Life、QIAamp等外企生產的提取試劑盒。
注:本次展示數據,不排除單次結果的數據偶然性。
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