近日，ctDNA檢測(cè)寫(xiě)入最/新版結(jié)腸癌NCCN指南（2021.V2版），值得注意的是，在術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)和輔助化療部分，增加ctDNA檢測(cè)方法，成為輔助臨床評(píng)估II期或III期結(jié)腸癌患者輔助治療決策和預(yù)后的檢測(cè)方法之一。
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結(jié)直腸癌（colorectal cancer，CRC）是最常見(jiàn)的消化道腫瘤之一，起病隱匿，早期病變位于黏膜層及黏膜下層，且病情發(fā)展緩慢，直至中晚期才會(huì)出現(xiàn)明顯臨床癥狀。早診斷早治療、實(shí)時(shí)監(jiān)控、靶向用藥以及個(gè)體化治療是提高CRC遠(yuǎn)期生存率、降低死亡率的關(guān)鍵，而無(wú)法準(zhǔn)確捕捉具有時(shí)空特異性的腫瘤是當(dāng)前癌癥診療面臨的最大難題，循環(huán)腫瘤DNA（circulating tumor，ctDNA）ctDNA 作為液體活檢的生物標(biāo)志物之一，具有較高的特異性，相較于傳統(tǒng)診斷手段，ctDNA檢測(cè)表現(xiàn)出諸多優(yōu)勢(shì)，是結(jié)腸直腸癌患者治療過(guò)程中頗具前景的生物標(biāo)志物。
ctDNA檢測(cè)平臺(tái)
對(duì)于ctDNA的檢測(cè)有NGS測(cè)序、數(shù)字PCR、ARMS-PCR、BEAMing等，不同平臺(tái)檢測(cè)靈敏度亦不相同，可以根據(jù)腫瘤患者疾病不同階段的需求，選擇適合的檢測(cè)技術(shù)。
ctDNA檢測(cè)在CRC診療中的應(yīng)用
1.早期診斷與治療監(jiān)測(cè)
多項(xiàng)研究表明定性定量檢測(cè) ctDNA水平變化可用于 CRC 患者的病情監(jiān)測(cè)、治療效果反饋、殘留微小病灶判斷及高危復(fù)發(fā)者識(shí)別等。與影像學(xué)或其他常規(guī)方法相比，ctDNA提供了一種更靈敏的檢測(cè)惡性腫瘤的方法。這個(gè)敏感性可被用于如下幾個(gè)方面：
- 早期診斷結(jié)直腸癌的臨床或影像學(xué)表現(xiàn)出現(xiàn)之前的檢測(cè)微小殘留病(MRD)，檢測(cè)ctDNA作為沒(méi)有疾病復(fù)發(fā)的臨床證據(jù)的患者完成潛在診斷與治療。
- 在有明顯放射學(xué)疾病的患者中，ctDNA似乎對(duì)腫瘤負(fù)荷的變化更敏感，可能有助于在新輔助環(huán)境中調(diào)整治療強(qiáng)度，并在需要姑息治療的患者中監(jiān)測(cè)腫瘤反應(yīng)。
2.用藥指導(dǎo)與耐藥監(jiān)測(cè)
在治療過(guò)程中，ctDNA也能監(jiān)測(cè)RAS基因、EGFR基因、MET基因、HER2基因等驅(qū)動(dòng)突變的狀態(tài)及全面突變信息，提供用藥指導(dǎo)，發(fā)現(xiàn)潛在治療靶點(diǎn)。
腫瘤耐藥是當(dāng)前CRC臨床治療面臨的最主要的問(wèn)題之一，利用ctDNA檢測(cè)可以非侵入性地了解耐藥突變的產(chǎn)生和尋找新的治療靶點(diǎn)且方便可行，有助于評(píng)估導(dǎo)致耐藥性出現(xiàn)的腫瘤進(jìn)化和異質(zhì)性，以及篩選最合適的治療方法。
3.預(yù)后評(píng)估
臨床研究表明，術(shù)后ctDNA可作為I-III期結(jié)腸癌復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)標(biāo)志物。由Reinert等人于2019年發(fā)表在JAMA Oncology上的一項(xiàng)針對(duì)130例I-III期結(jié)腸癌患者的多中心前瞻性研究，采用基于多重PCR捕獲的定制化ctDNA檢測(cè)技術(shù)，對(duì)術(shù)后患者進(jìn)行連續(xù)的ctDNA監(jiān)測(cè)。
在術(shù)后30天ctDNA檢測(cè)呈陽(yáng)性的患者的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)是呈陰性患者的7倍（Hazard Ratio (HR)為 7.2）；同樣的，在輔助化療后，ctDNA檢測(cè)呈陽(yáng)性的患者的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)是呈陰性患者的17.5倍（HR為 17.5）。
術(shù)后ctDNA的陰陽(yáng)性狀態(tài)可以作為預(yù)后生物標(biāo)志物（prognostic biomarker），ctDNA檢測(cè)與影像學(xué)相比平均提前8.7月發(fā)現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)，最早提前發(fā)現(xiàn)時(shí)間長(zhǎng)達(dá)16.5個(gè)月。
ctDNA檢測(cè)質(zhì)控
ctDNA檢測(cè)的一大挑戰(zhàn)是患者血液中ctDNA的含量極低，這意味著實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的時(shí)候，等位基因突變頻率比以前要低得多。那怎樣才能確保真實(shí)的檢測(cè)限，降低假陽(yáng)性？
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不同濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)試結(jié)果 測(cè)試結(jié)果表明： 菁良ctDNA標(biāo)準(zhǔn)品 ? 更多ctDNA標(biāo)準(zhǔn)品有關(guān)信息 可點(diǎn)擊“www.gene-well.com”查看
使用具有明確的等位基因梯度頻率范圍的參考標(biāo)準(zhǔn)可以幫助確定檢測(cè)的真實(shí)極限，降低誤報(bào)的風(fēng)險(xiǎn)，也可以?xún)?yōu)化檢測(cè)流程，及時(shí)校準(zhǔn)，以避免檢測(cè)過(guò)程中出現(xiàn)任何誤差。
菁良基因研發(fā)了一系列細(xì)胞系來(lái)源的ctDNA參考標(biāo)準(zhǔn)品，最大/程度模擬患者樣本，可以幫助開(kāi)發(fā)、優(yōu)化、監(jiān)測(cè)和控制檢測(cè)的準(zhǔn)確性。這些標(biāo)準(zhǔn)品包含一系列結(jié)直腸癌中常見(jiàn)突變位點(diǎn)，產(chǎn)品平均片段分布在160bp左右，能最大/程度接近真實(shí)血漿ctDN**段分布。
肺癌ctDNA標(biāo)準(zhǔn)品套裝
? 包含了經(jīng)過(guò) ddPCR 驗(yàn)證的6個(gè)SNV、1個(gè)插入及1個(gè)缺失變異位點(diǎn)
? 每個(gè)位點(diǎn)均含有0%、0.1%、1%三個(gè)梯度的突變頻率
? 可用于最低檢測(cè)限的驗(yàn)證及線性驗(yàn)證
腫瘤結(jié)構(gòu)變異 5% ctDNA標(biāo)準(zhǔn)品
? 主要用于ctDNA樣本復(fù)雜結(jié)構(gòu)變異的檢測(cè)
? 優(yōu)化和驗(yàn)證新的癌癥panels，并監(jiān)測(cè)流程性能
? 分析檢測(cè)流程的靈敏度，準(zhǔn)確度和特異性
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