成人呼吸道感染類型多樣，不同感染類型及不同基礎疾病患者病原譜各具特點。傳統微生物學及免疫學技術對呼吸道病原體檢測的靈敏度偏低，核酸檢測技術的發展和臨床應用大幅提高了呼吸道病原體的診斷能力。
中華檢驗醫學培訓工程專家委員會聯合中華醫學會呼吸病學分會組織我國多學科專家共同撰寫了 《成人呼吸道感染病原診斷核酸檢測技術臨床應用專家共識 ( 2023) 》，分析了實時熒光聚合酶鏈反應 ( polymerase chain reaction，PCR) 技術、等溫擴增技術、數字PCR技術、核酸即時檢測技術和病原體高通量測序技術的臨床應用場景、技術特點和性能驗證要求。
呼吸道病原體核酸檢測方法
實時熒光PCR技術
性能驗證要求
定量檢測需驗證的性能指標應包括: 正確度、精密度 ( 包括測量重復性和測量中間精密度) 、不確定性、特異度 ( 包括抗干擾能力) 、靈敏度、檢出限、定量限、線性區間 ( 可報告區間) 等。定性檢測需驗證的性能指標包括: 方法符合率、檢出限、抗干擾能力、交叉反應等，具體性能指標以產品說明書要求為準。
等溫擴增技術
性能驗證要求
通常等溫擴增為定性實驗，需滿足中國合格評定國家認可委員會 GL039定性實驗的驗證要求: 符合率≥90% ; 陰性和弱陽性樣本精密度檢測結果完全一致; 參照廠家說明進行靶基因檢測，5 次重復檢測均應檢出，20 次重復檢測應檢出至少 18 次。
數字PCR技術
性能驗證要求
定量檢測性能驗證指標應包括: 反應單元體積精密度、準確度、有效率; 樣本檢測重復性、線性、動態范圍、靈敏度。應使用泊松分布計算靶標分子拷貝數，不同熒光通道之間應不存在相互干擾?；谛酒臄底諴CR芯片內應無氣泡，陽性和陰性的隨機分布應得到視覺確認。微滴數字 PCR單次反應生成的最小液滴數應符合廠商建議或用戶自定義值。
核酸 POCT 技術
性能驗證要求
定性檢測性能驗證指標應包括: 符合率≥90% ;陰性和弱陽性樣本精密度檢測結果完全一致; 靶基因5 次重復檢測均應檢出，20 次檢測應至少檢出 18 次。
定量檢測性能驗證指標應包括: 至少 80% 的樣本結果偏倚在±7. 5% 區間內; 批內和批間精密度滿足說明書范圍; 線性區間滿足說明書范圍; 20 次檢測中≥18 個檢測結果與參考值之間的偏倚在±7. 5%區間內。
病原體高通量測序技術
性能驗證要求
實驗室在開展病原體高通量測序臨床檢測前，需參考實驗室自建方法的相關要求完成方法學建立和性能確認，結合預期臨床用途確立預期性能指標，應包括: ( 1) 生信流程評估: 最低測序數據量、準確率、召回率、精確率和 F1 值等; ( 2) 全流程性能確認:背景核酸數據模型、陽性閾值、重復性、最低檢測限、抗干擾力、穩定性等; ( 3) 臨床評估: 對一定數量的真實臨床標本進行檢測，確定陰性預測值和陽性預測值。
菁良傳染病質控品
菁良科技根據國內外病原檢測對于質控品的需求，開發多款細菌真菌的滅活菌液質控品和DNA/RNA類的滅活病毒質控品。
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滅活處理，確保生物安全性
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保留核酸序列的完整性
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參與核酸提取，全流程質控
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PCR/NGS等多檢測平臺均適用
同時可根據檢測需求進行菌液、核酸溶液、假病毒及體外轉錄RNA質控品個性化定制。
參考文獻
中華檢驗醫學培訓工程專家委員會, 中華醫學會呼吸病學分會. 成人呼吸道感染病原診斷核酸檢測技術臨床應用專家共識(2023)[J]. 協和醫學雜志, 2023, 14(5): 959-971. doi: 10.12290/xhyxzz.2023-0338