成人呼吸道感染類型多樣，不同感染類型及不同基礎(chǔ)疾病患者病原譜各具特點(diǎn)。傳統(tǒng)微生物學(xué)及免疫學(xué)技術(shù)對(duì)呼吸道病原體檢測(cè)的靈敏度偏低，核酸檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展和臨床應(yīng)用大幅提高了呼吸道病原體的診斷能力。
中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)培訓(xùn)工程專家委員會(huì)聯(lián)合中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)組織我國(guó)多學(xué)科專家共同撰寫了 《成人呼吸道感染病原診斷核酸檢測(cè)技術(shù)臨床應(yīng)用專家共識(shí) ( 2023) 》，分析了實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng) ( polymerase chain reaction，PCR) 技術(shù)、等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)、數(shù)字PCR技術(shù)、核酸即時(shí)檢測(cè)技術(shù)和病原體高通量測(cè)序技術(shù)的臨床應(yīng)用場(chǎng)景、技術(shù)特點(diǎn)和性能驗(yàn)證要求。
呼吸道病原體核酸檢測(cè)方法
實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)
性能驗(yàn)證要求
定量檢測(cè)需驗(yàn)證的性能指標(biāo)應(yīng)包括: 正確度、精密度 ( 包括測(cè)量重復(fù)性和測(cè)量中間精密度) 、不確定性、特異度 ( 包括抗干擾能力) 、靈敏度、檢出限、定量限、線性區(qū)間 ( 可報(bào)告區(qū)間) 等。定性檢測(cè)需驗(yàn)證的性能指標(biāo)包括: 方法符合率、檢出限、抗干擾能力、交叉反應(yīng)等，具體性能指標(biāo)以產(chǎn)品說(shuō)明書要求為準(zhǔn)。
等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)
性能驗(yàn)證要求
通常等溫?cái)U(kuò)增為定性實(shí)驗(yàn)，需滿足中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì) GL039定性實(shí)驗(yàn)的驗(yàn)證要求: 符合率≥90% ; 陰性和弱陽(yáng)性樣本精密度檢測(cè)結(jié)果完全一致; 參照廠家說(shuō)明進(jìn)行靶基因檢測(cè)，5 次重復(fù)檢測(cè)均應(yīng)檢出，20 次重復(fù)檢測(cè)應(yīng)檢出至少 18 次。
數(shù)字PCR技術(shù)
性能驗(yàn)證要求
定量檢測(cè)性能驗(yàn)證指標(biāo)應(yīng)包括: 反應(yīng)單元體積精密度、準(zhǔn)確度、有效率; 樣本檢測(cè)重復(fù)性、線性、動(dòng)態(tài)范圍、靈敏度。應(yīng)使用泊松分布計(jì)算靶標(biāo)分子拷貝數(shù)，不同熒光通道之間應(yīng)不存在相互干擾。基于芯片的數(shù)字PCR芯片內(nèi)應(yīng)無(wú)氣泡，陽(yáng)性和陰性的隨機(jī)分布應(yīng)得到視覺(jué)確認(rèn)。微滴數(shù)字 PCR單次反應(yīng)生成的最小液滴數(shù)應(yīng)符合廠商建議或用戶自定義值。
核酸 POCT 技術(shù)
性能驗(yàn)證要求
定性檢測(cè)性能驗(yàn)證指標(biāo)應(yīng)包括: 符合率≥90% ;陰性和弱陽(yáng)性樣本精密度檢測(cè)結(jié)果完全一致; 靶基因5 次重復(fù)檢測(cè)均應(yīng)檢出，20 次檢測(cè)應(yīng)至少檢出 18 次。
定量檢測(cè)性能驗(yàn)證指標(biāo)應(yīng)包括: 至少 80% 的樣本結(jié)果偏倚在±7. 5% 區(qū)間內(nèi); 批內(nèi)和批間精密度滿足說(shuō)明書范圍; 線性區(qū)間滿足說(shuō)明書范圍; 20 次檢測(cè)中≥18 個(gè)檢測(cè)結(jié)果與參考值之間的偏倚在±7. 5%區(qū)間內(nèi)。
病原體高通量測(cè)序技術(shù)
性能驗(yàn)證要求
實(shí)驗(yàn)室在開展病原體高通量測(cè)序臨床檢測(cè)前，需參考實(shí)驗(yàn)室自建方法的相關(guān)要求完成方法學(xué)建立和性能確認(rèn)，結(jié)合預(yù)期臨床用途確立預(yù)期性能指標(biāo)，應(yīng)包括: ( 1) 生信流程評(píng)估: 最低測(cè)序數(shù)據(jù)量、準(zhǔn)確率、召回率、精確率和 F1 值等; ( 2) 全流程性能確認(rèn):背景核酸數(shù)據(jù)模型、陽(yáng)性閾值、重復(fù)性、最低檢測(cè)限、抗干擾力、穩(wěn)定性等; ( 3) 臨床評(píng)估: 對(duì)一定數(shù)量的真實(shí)臨床標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，確定陰性預(yù)測(cè)值和陽(yáng)性預(yù)測(cè)值。
菁良傳染病質(zhì)控品
菁良科技根據(jù)國(guó)內(nèi)外病原檢測(cè)對(duì)于質(zhì)控品的需求，開發(fā)多款細(xì)菌真菌的滅活菌液質(zhì)控品和DNA/RNA類的滅活病毒質(zhì)控品。
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滅活處理，確保生物安全性
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保留核酸序列的完整性
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參與核酸提取，全流程質(zhì)控
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PCR/NGS等多檢測(cè)平臺(tái)均適用
同時(shí)可根據(jù)檢測(cè)需求進(jìn)行菌液、核酸溶液、假病毒及體外轉(zhuǎn)錄RNA質(zhì)控品個(gè)性化定制。
參考文獻(xiàn)
中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)培訓(xùn)工程專家委員會(huì), 中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì). 成人呼吸道感染病原診斷核酸檢測(cè)技術(shù)臨床應(yīng)用專家共識(shí)(2023)[J]. 協(xié)和醫(yī)學(xué)雜志, 2023, 14(5): 959-971. doi: 10.12290/xhyxzz.2023-0338