SARS-CoV-2的棘突蛋白受體結(jié)合域（RBD）是病毒嗜性和感染性的關(guān)鍵因素[1,2]。最新研究分析了全球SARS-CoV-2毒株的基因組，發(fā)現(xiàn)32種RBD突變毒株。依據(jù)RBD突變位點(diǎn)，以上突變毒株可以分為10種突變類型。其中在武漢，深圳，香港和法國(guó)流行的三種突變毒株的棘突蛋白受體結(jié)合域（RBD）顯示出增強(qiáng)的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性和更高的受體親和力，表明這些突變病毒可能已增強(qiáng)了對(duì)人類的感染力[3]。
SARS-CoV-2突變毒株分布及RBD突變分型 Fig.1 SARS-CoV-2病毒種類及分布，紅色為親和力增強(qiáng)型毒株； 黃色突變毒株親和力與原型毒株無(wú)明顯差異 由于RBD是結(jié)合人ACE2并啟動(dòng)細(xì)胞進(jìn)入的唯一結(jié)構(gòu)域，通常認(rèn)為RBD應(yīng)高度保守。但是多態(tài)性和差異性分析表明，與S蛋白的其他區(qū)域類似，RBD序列也呈現(xiàn)多樣性[3]。 已公布基因組序列的1609個(gè)SARS-CoV-2毒株中，經(jīng)多態(tài)性分析發(fā)現(xiàn)有32個(gè)毒株在RBD中含有氨基酸突變。這些毒株來(lái)自多個(gè)地區(qū)，包括中國(guó)，英國(guó)，芬蘭，法國(guó)，比利時(shí)，美國(guó)和印度。大多數(shù)突變體與最先發(fā)現(xiàn)的基因組（SARS-CoV-2 WuHan-Hu-1）相比，僅相差一個(gè)氨基酸。進(jìn)一步分析得出32個(gè)RBD突變型分為10種類型（Fig. 1）[3]。 三種RBD突變類型與人ACE2受體結(jié)合力提高 利用分子動(dòng)力學(xué)模擬分析比較原型毒株SARS-CoV-2（SARS-CoV-2 Wuhan-Hu-1）RBD蛋白和突變型毒株的RBD蛋白與人ACE2的結(jié)合能力。分析結(jié)果顯示與原型毒株RBD蛋白相比，三個(gè)RBD突變蛋白（N354D&D364Y，V367F，W436R）的ΔG均為-200 kJ / mol，比原型毒株低約25%，與人ACE-2的親和力顯著提高[3]。 RBD突變的結(jié)構(gòu)解析 RBD與ACE2的結(jié)合界面主要是無(wú)規(guī)卷曲構(gòu)象，因而缺乏結(jié)構(gòu)上的剛性。通過增加骨架的剛性可以維持相互作用表面的結(jié)合構(gòu)象，從而提高親和力。以殘基510-524為中心的β折疊結(jié)構(gòu)就起到了這種支架的作用，該區(qū)域附近的突變體N354D，D364Y，V367F和W436R在結(jié)構(gòu)上增加了剛性作用，同時(shí)這些突變位點(diǎn)導(dǎo)致結(jié)合位點(diǎn)區(qū)域的ΔG總體降低，增加了結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，這些因素共同導(dǎo)致了突變體RBD與ACE2親和力的提高。 另外，ACE2表面附近帶大量負(fù)電荷，而突變體W436R提供了帶正電的氨基酸。這種潛在的靜電作用力可能有助于親和力的提高。 Fig. 2 RBD突變體的結(jié)構(gòu)分析及其結(jié)合親和力的影響： 突變氨基酸和片段510-524的空間位置
針對(duì)文章中提到RBD突變體與ACE2蛋白的親和力增強(qiáng)這一觀點(diǎn)，ACROBiosystems用突變型和原型RBD與ACE2的結(jié)合活性做了ELISA、SPR、BLI三種技術(shù)的驗(yàn)證。
ELISA驗(yàn)證 ACROBiosystems SARS-CoV-2 RBD突變蛋白驗(yàn)證ELISA Binding Assay結(jié)果顯示，所有RBD突變蛋白與人ACE2受體蛋白結(jié)合活性均高于原型毒株RBD蛋白, RBD (V367F) EC50: 0.31nM > RBD (W436R) EC50: 0.89nM > RBD (N354D, D364Y) EC50: 0.97nM > 原型毒株RBD EC50: 1.47nM (Fig. 3)。 Fig. 3 Human ACE2與 SARS-CoV-2 RBD蛋白結(jié)合活性ELISA比較
BLI驗(yàn)證 BLI驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，突變蛋白 RBD(V367F)，RBD (W436R)和RBD (N354D, D364Y) 與ACE2的親和力均達(dá)到nM水平, KD值分別為5.5nM, 6.85nM和6.32nM，比原型毒株RBD與ACE2 受體蛋白親和力（24.4nM）高3倍以上（Fig. 4）。 Fig. 4 BLI技術(shù)驗(yàn)證Human ACE2與 SARS-CoV-2 RBD蛋白親和力 Bioactivity- SPR 與BLI檢測(cè)結(jié)果類似，SPR原型毒株RBD與人ACE2受體蛋白親和力為13.1nM，突變蛋白R(shí)BD(V367F)，RBD (W436R) 和RBD (N354D, D364Y)的KD值分別為4.33nM、6.96nM和7.57nM（Fig. 5）。 Fig. 5 SPR技術(shù)驗(yàn)證Human ACE2與 SARS-CoV-2 RBD蛋白親和力
根據(jù)ELISA、SPR、BLI技術(shù)的結(jié)合活性驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，突變型RBD(V367F)、RBD (W436R) 和RBD (N354D, D364Y)與ACE2的親和力均高于原型毒株，與文章中結(jié)構(gòu)分析結(jié)果一致。
>>>>RBD蛋白產(chǎn)品列表
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貨號(hào) |
種屬 |
產(chǎn)品描述 |
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SARS-CoV-2 |
Biotinylated SARS-CoV-2 (COVID-19) S protein RBD, His,Avitag? (MALS verified) |
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SARS-CoV-2 |
SARS-CoV-2 (COVID-19) S protein RBD, Fc Tag (MALS verified) |
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SARS-CoV-2 |
SARS-CoV-2 (COVID-19) S protein RBD, His Tag (MALS verified) |
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SARS-CoV-2 |
SARS-CoV-2 (COVID-19) S protein RBD, Mouse IgG2a Fc Tag |
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SARS-CoV-2 |
SARS-CoV-2 (COVID-19) S protein RBD (V367F), His Tag |
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SARS-CoV-2 |
北京百普賽斯生物科技股份有限公司 商家主頁(yè)地 址： 北京經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)宏達(dá)北路8號(hào)5號(hào)樓4層 聯(lián)系人： 占女士 電 話： 400-682-2521 傳 真： Email：order.cn@acrobiosystems.com 相關(guān)咨詢專題一：818 號(hào)令及配套指引文件解析，夯實(shí) CGT 發(fā)展根基 (暫無(wú)發(fā)布時(shí)間 瀏覽數(shù):2143) 內(nèi)卷時(shí)代：ADC下一代靶點(diǎn)如何布局？ (暫無(wú)發(fā)布時(shí)間 瀏覽數(shù):1994) 【重磅新品】快速評(píng)估tLNP遞送潛力—DTrack?內(nèi)吞效率檢測(cè)方案 (暫無(wú)發(fā)布時(shí)間 瀏覽數(shù):2013) 【重磅上新】Integrin系列TR-FRET抑制劑篩選試劑盒，更高信號(hào)表現(xiàn)，賦能高效藥物篩選 (暫無(wú)發(fā)布時(shí)間 瀏覽數(shù):1960) 你測(cè)到的ADC暴露，真的是“完整ADC”嗎？ (暫無(wú)發(fā)布時(shí)間 瀏覽數(shù):3372) 專題一：818 號(hào)令及配套指引文件解析，夯實(shí) CGT 發(fā)展根基 (暫無(wú)發(fā)布時(shí)間 瀏覽數(shù):3322) ACRO蘇州GMP智能工廠線上Open Day · 誠(chéng)邀參訪 (暫無(wú)發(fā)布時(shí)間 瀏覽數(shù):3391) ComboX 新品發(fā)布｜高靈敏 SA-HRP：用量 “減配”，信號(hào) “高配” (暫無(wú)發(fā)布時(shí)間 瀏覽數(shù):6668) 從工藝開發(fā)到產(chǎn)品放行：宿主DNA殘留檢測(cè)正成為關(guān)鍵質(zhì)量控制指標(biāo) (暫無(wú)發(fā)布時(shí)間 瀏覽數(shù):5580) 【ASCO 2026】ADC領(lǐng)域深度復(fù)盤：一線突破、雙抗ADC爆發(fā)、技術(shù)革新全新演進(jìn) (暫無(wú)發(fā)布時(shí)間 瀏覽數(shù):6987) ADVERTISEMENT
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