在細胞世界，鞘脂類物質就像一組精密的”生命天平”，而神經酰胺（Cer）和鞘磷脂（SM）就是天平兩端的砝碼。Cer多為抑癌成分，其生成和清除缺陷會導致癌細胞存活和化療耐藥；SM則對癌細胞增殖等過程至關重要。CERT(神經酰胺轉運蛋白)可運輸Cer，影響Cer與SM比例，抑制CERT能誘導多種癌細胞凋亡，是潛在抗癌靶點。在急性髓系白血?。ˋML）中，FLT3（Fms樣酪氨酸激酶3）突變就像給癌細胞裝上了”永動機”，用FLT3抑制劑治療雖能誘導Cer積累殺死癌細胞，但針對Cer清除途徑關鍵蛋白能否增加AML細胞對FLT3抑制劑的敏感性尚不明確。
近期，廣東省人民醫院曾輝教授團隊在Nature Communications在線發表題為“Targeting CERT sensitizes AML Cells to FLT3 Inhibitors through activating GRP78-ATF6-CHOP Axis ”的研究論文，揭示了靶向CERT通過誘導Cer的積累，激活了內質網應激（ERS）中的GRP78-ATF6-CHOP信號通路，從而進一步觸發了Cer依賴的線粒體自噬，與FLT3抑制劑產生協同效應，能有效克服AML常見的FLT3-ITD耐藥問題，為臨床聯合治療提供了創新的分子靶點。（麥特繪譜提供脂質組學檢測服務）
【研究設計】?
1. 實驗對象
選用多種AML細胞系（如MV4-11、Molm13等）、健康供者的骨髓細胞、AML患者的骨髓樣本以及B-NDG小鼠。
2. 實驗分組
細胞實驗中，設置對照組（DMSO處理）、單藥處理組（CERT抑制劑HPA-12或FLT3抑制劑Creno單獨處理）和聯合處理組（HPA-12與Creno聯合處理）；動物實驗將小鼠分為未處理組、Creno處理組、HPA-12處理組和聯合處理組。
3. 實驗方法
運用Westernblot檢測蛋白表達水平；CCK-8法測定細胞活力；EdU實驗評估細胞增殖；AnnexinV/PI染色結合流式細胞術檢測細胞凋亡；構建穩定敲低細胞系探究基因功能；建立AML異種移植模型評估藥物體內療效；采用RNA-seq、靶向脂質組學等技術分析相關機制。
?【研究思路】
圖1. 技術路線
Cer：神經酰胺；SM：鞘磷脂；AML：急性髓系白血病；CERT：神經酰胺轉運蛋白；FLT3-ITD：FLT3基因內部串聯重復突變；FLT3-TKD：FLT3基因激酶結構域突變；FLT3/WT：FLT3野生型；HPA-12：CERT抑制劑；Greno：FLT3抑制劑
?【研究結果】
1. 抑制CERT可抑制FLT3-ITD+AML細胞株的生長并促進其凋亡
與FLT3-WT和健康供體相比，CERT在FLT3-ITD突變的AML細胞系中高表達。使用CERT抑制劑HPA-12或shRNA敲低CERT后，FLT3-ITD突變細胞的活力顯著降低，且呈現劑量依賴性，而對FLT3-WT細胞無顯著影響。進一步實驗表明CERT抑制可通過減少EdU陽性細胞（增殖抑制）和增加AnnexinV陽性細胞（凋亡誘導）雙重機制發揮作用。
圖2.HPA-12抑制CERT可降低AML細胞系的活力并促進其凋亡
2. CERT抑制劑與FLT3抑制劑協同抑制AML細胞的生長
對FLT3抑制劑耐藥的AML患者常伴隨CERT高表達。聯合使用CERT抑制劑HPA-12與FLT3抑制劑Creno可顯著增強抗白血病效果，在FLT3-ITD細胞中，聯合指數和Bliss模型證實兩者具有強協同作用，能更有效抑制增殖（EdU陽性細胞減少）并促進凋亡（AnnexinV陽性細胞增加）?；蚯贸龑嶒炦M一步驗證協同作用的特異性——CERT敲除后，HPA-12與Creno的協同效應顯著減弱。
圖3.HPA-12與Creno聯用時具有協同作用
3. HPA-12聯合Creno可延長AML移植小鼠的生存期
構建AML異種移植模型，進一步評估HPA-12單藥及與Creno聯用的治療效果，聯合治療組（Combo）較單藥組表現出更顯著的白血病抑制效果，包括生物發光信號降低、脾臟重量減輕及骨髓/脾臟中CD45+白血病細胞減少。流式細胞術進一步證實，聯合治療可顯著降低骨髓、脾臟和外周血中CD45+/CD33+白血病細胞負荷。生存分析表明，聯合治療能延長小鼠生存期，且未引起明顯體重變化。
圖4. HPA-12與Creno聯合應用根除AML
4. 聯合治療誘導Cer積累
靶向脂質組學分析(麥特繪譜提供)結果顯示，聯合治療顯著改變了AML細胞的鞘脂代謝譜，表現為神經酰胺（Cer）多種鏈長形式的顯著累積，鞘磷脂（SM）合成減少。TEM和免疫熒光實驗表明，Cer在細胞內質網積累且向高爾基體轉運受阻。
圖5. HPA-12和Creno組合的協同作用誘導Cer產生
5. GRP78/ATF6/CHOP信號軸在AML聯合治療中的核心作用
RNA-seq及Westernblot分析表明，聯合處理激活內質網應激相關的GRP78/ATF6/CHOP軸，而非IRE1或PERK途徑。ER-Stress抑制劑4-PBA可部分逆轉聯合處理對細胞活力和凋亡的影響。構建GRP78、ATF6和CHOP穩定敲除的AML細胞系，發現GRP78敲除不僅減弱了聯合治療的細胞毒性，還下調了ATF6和CHOP表達；ATF6缺失顯著提升細胞存活率，并減少凋亡細胞比例；下游效應分子CHOP敲除同樣能逆轉聯合治療的抑癌效果，表明GRP78/ATF6/CHOP信號通路是HPA-12與Creno協同抗AML作用的關鍵分子機制。
圖6. HPA-12和Creno聯合誘導AML細胞ER應激并激活GRP78/ATF6/CHOP軸
6. Cer介導的線粒體功能障礙與自噬在AML聯合治療中的關鍵作用
進一步研究發現聯合治療導致神經酰胺在線粒體內異常蓄積，引發線粒體膜電位下降和活性氧水平升高；電鏡觀察到線粒體結構損傷及自噬體包裹損傷線粒體現象；分子水平證實LC3II-線粒體共定位增強及自噬標志物Atg7/P62上調；功能實驗顯示自噬抑制劑CQ和線粒體自噬特異性抑制劑Mdivi-1均可部分逆轉聯合治療的細胞毒性。表明神經酰胺代謝紊亂→線粒體功能障礙→線粒體自噬激活的級聯反應是抗白血病效應的核心機制。
圖7. CER介導的線粒體功能障礙與自噬
7. 聯合治療對原發性AML樣本的療效
HPA-12單藥或與Creno聯合處理，可降低FLT3-ITD+和FLT3-TKD+原發性AML細胞活力、誘導凋亡，并激活GRP78/ATF6/CHOP軸，但對FLT3/WT原發性AML細胞效果不佳。
圖8. 聯合治療對FLT3-ITD+和FLT3 TKD+AML患者來源的細胞有效
?【研究結論】
抑制CERT可抑制AML細胞生長、誘導凋亡，CERT抑制劑HPA-12與FLT3抑制劑Creno聯合使用在體外和體內均能有效治療AML，尤其對FLT3突變患者可能是一種有前景的聯合治療方案，聯合治療的協同效應通過誘導Cer積累，激活GRP78/ATF6/CHOP軸和線粒體自噬實現。未來有待進一步探究鞘脂代謝和UPR/ISR在正常造血和白血病中的作用，明確CERT和FLT3在AML亞型中的作用，評估聯合治療在更多化療耐藥群體中的效果。
參考文獻
Targeting CERT sensitizes AML Cells to FLT3 Inhibitors through activating GRP78-ATF6-CHOP Axis. Nature Communications. 2025
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