在生物醫藥行業中，動物實驗廣泛應用于新藥研發、疾病研究和基礎研究。實驗動物模型在新藥的研發過程中具有重要作用，能夠模擬人類疾病，降低風險，提高效率，確保藥物的安全性和有效性。近岸蛋白提供皮膚炎癥與神經疾病造模所需的熱門重組蛋白，目前已服務海內外數十家客戶。動物造模蛋白產品覆蓋銀屑病(Psoriasis) 、特異性皮炎(atopic dermatitis，AD) 等皮膚炎癥模型，以及多發性硬化癥(multiple sclerosis，MS) 、帕金森疾病(Parkinson disease，PD)等神經疾病模型。
銀屑病模型-Psoriasis模型
銀屑病是一種常見的慢性炎癥性疾病，臨床表現為紅斑、斑塊、鱗屑的慢性炎癥性皮膚病。在各種細胞因子注射小鼠模型中，注射IL-23是最為常見的建模方式[1]。小鼠耳廓皮內注射IL-23可通過IL-23/Th17軸誘發炎癥。IL-23激活下游反應誘導分化Th17細胞，分泌的IL-17和IL-22作用于角質形成細胞等引起皮膚細胞的炎癥損傷。目前，細胞因子模型誘導銀屑病易使用、能夠與其他各種基因工程小鼠模型聯合使用、建模時間較短，靶點通路明確等優點。向小鼠皮膚注射IL-23、IL-12、IL-36、IL-22和IL-33已被應用于誘導銀屑病樣皮膚炎癥。
近岸蛋白不僅提供IL-23細胞因子用于銀屑病造模，IL-33和IL-36等細胞因子也被廣泛用于皮膚炎癥建模。經過與上海精誠智研生物醫藥有限公司免疫團隊聯合開發，成功驗證了模型的穩定性，助力靶向皮膚炎癥的藥物開發。
IL-23參考免疫策略(耳部）
使用無菌PBS將rIL-23儲備液稀釋至工作濃度為25ng/μL，每只小鼠每次注射需要20μL。麻醉小鼠后，將30號針頭從根部彎曲90度，然后將針頭插入耳部，盡量以較淺的角度使針頭斜面朝上，以便將溶液注射到真皮層。每隔一天進行一次耳部厚度測量和皮內注射，計算注射rIL-23耳朵相對于第一天耳部厚度的變化。在每次注射rIL-23之前，應對每只處于麻醉狀態的小鼠進行一次耳部厚度測量[2]。
IL-23參考免疫策略(背部）
小鼠麻醉后，使用電動推剪或脫毛膏將小鼠背部毛發剃除。三天后進行rIL-23的注射。為此，首先將小鼠rIL-23儲備液在無菌PBS中稀釋至工作濃度為25ng/μL，每次注射需要20μL，每只小鼠注射2次。將30號針頭從根部彎曲 90 度，然后將針頭以盡可能淺的角度，斜面朝上插入皮膚，以便將溶液注入真皮層。以緩慢、連續的動作在背部兩側的兩個部位分別注射 20μL含 500 ng rIL-23 的溶液或 20 μL PBS 對照溶液（每只小鼠總計 1 μg）每天進行皮內注射，一般第四天會出現銀屑病樣變化，第五天開始炎癥會有所減輕[2]。
體內造模數據展示
體內造模數據由上海精誠智研公司友情提供
多發性硬化癥-EAE模型
多發性硬化癥是一種中樞神經系統慢性炎癥性疾病，其主要病理改變為中樞神經系統（CNS）白質脫髓鞘，最終會導致神經元死亡。研究者認為，不僅髓鞘特異性 CD4+T 細胞攻擊中樞神經系統髓鞘介導了 MS 的發生，而且 B 細胞作為抗原遞呈細胞（APCs）、產生促炎細胞因子和趨化因子以及分泌針對髓鞘和軸突的自身抗體也都起著重要作用[3]。CD20 單抗 Ofatumumab 已于 2020 年和 2021 年分別獲得美國 FDA 和歐盟的批準，它通過結合 B 細胞表面的 CD20 分子并誘導有效的 B 細胞溶解和耗盡而發揮作用，用于治療成人復發性多發性硬化癥，展現出針對 B 細胞相關靶點，尤其是 B 細胞耗竭療法在 MS 治療中的巨大潛力。實驗性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE) 模型是多發性硬化癥的常用動物模型。這個模型通過引起小鼠或者大鼠免疫系統攻擊其自身神經組織而導致神經損傷和癥狀。
近岸蛋白自主研發重組人MOG1-125蛋白，純度＞95%，不僅被國內頭部藥企和CRO公司廣泛選用，適用于各種模式動物EAE疾病建模，尤其是針對B細胞相關靶點的模型研究。
MOG(MOG1-125)參考免疫策略
在誘導實驗性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）時，將100μg MOG 1-125通過超聲乳化的方式混入添加了5mg/mL的結核分枝桿菌的不完全弗氏佐劑中。小鼠在第0天接受皮下注射該乳化劑，并且在第0天和第2天接受腹腔注射300ng的百日咳毒素。每2天檢測一次臨床評分和體重，直至出現癥狀，之后則改為每日檢測[4]。
帕金森疾病模型-PD模型
帕金森病是最常見的神經退行性疾病之一，其主要病理變化是黑質致密部中多巴胺能神經元進行性丟失且伴有α-突觸核蛋白 (alpha-Synuclein，SNCA)為主要成分的路易小體的形成。相比于使用神經毒素（如6-OHDA和MPTP）殺傷多巴胺神經元的帕金森模型，基于alpha-Synuclein的帕金森病模型由于在時程上能夠較好地模擬帕金森病發生、發展的全過程，這有利于發現和識別新的治療靶點。
近岸蛋白提供超低內毒素(<0.05 EU/mg),純度＞95%的alpha-Synuclein蛋白，用于帕金森疾病建模。該alpha-Synuclein單體可在體外制備預制纖維（PFFs），通過腦立體定位注射的方式將PFFs注射進腦內，可誘發內源alpha-Synuclein的聚集、磷酸化和泛素化反應，適用于驅動路易小體形成和擴散的藥物機制研究，以及適用于阻斷該過程化合物的篩選和有效性驗證。
alpha-Synuclein參考免疫策略
重組人alpha-Synuclein按照已發表的方案被制成纖維狀[5]，并制備成預成型纖維（PFFs）以便用于體內給藥。alpha-Synuclein PFF和單體溶液的最終濃度為2μg/μL。采用無菌技術，用異氟烷對動物進行麻醉并為立體定向手術做準備。當分兩次給藥共注入10μg PFFs，以0.5μL/min的速度在AP +0.3、ML +2.2mm、DV -3.0mm及 -4.0mm處注入2.5μL體積中含5μg PFFs的溶液[6]。
除造模蛋白外，近岸蛋白同時提供實驗所需的IgG1/4同型對照及180+陽參抗體，還可提供技術支持和模型構建相關重組蛋白定制服務，歡迎咨詢！
參考文獻
[1] Chan JR, Blumenschein W, Murphy E, Diveu C, Wiekowski M, Abbondanzo S, Lucian L, Geissler R, Brodie S, Kimball AB, Gorman DM, Smith K, de Waal Malefyt R, Kastelein RA, McClanahan TK, Bowman EP. IL-23 stimulates epidermal hyperplasia via TNF and IL-20R2-dependent mechanisms with implications for psoriasis pathogenesis. J Exp Med. 2006 Nov 27;203(12):2577-87. doi: 10.1084/jem.20060244. Epub 2006 Oct 30. PMID: 17074928; PMCID: PMC2118145.
[2] Singh TP, Zhang HH, Hwang ST, Farber JM. IL-23- and Imiquimod-Induced Models of Experimental Psoriasis in Mice. Curr Protoc Immunol. 2019 Jun;125(1):e71. doi: 10.1002/cpim.71. Epub 2019 Jan 7. PMID: 30615272.
[3] Hauser SL, Waubant E, Arnold DL, Vollmer T, Antel J, Fox RJ, Bar-Or A, Panzara M, Sarkar N, Agarwal S, Langer-Gould A, Smith CH; HERMES Trial Group. B-cell depletion with rituximab in relapsing-remitting multiple sclerosis. N Engl J Med. 2008 Feb 14;358(7):676-88. doi: 10.1056/NEJMoa0706383. PMID: 18272891.
[4] Faust MA, Gibbs L, Oviedo JM, Cornwall DH, Fairfax KC, Zhou Z, Lamb TJ, Evavold BD. B Cells Influence Encephalitogenic T Cell Frequency to Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein (MOG)38-49 during Full-length MOG Protein-Induced Demyelinating Disease. Immunohorizons. 2024 Sep 1;8(9):729-739. doi: 10.4049/immunohorizons.2400069. PMID: 39330967; PMCID: PMC11447661.
[5] Polinski NK, Volpicelli-Daley LA, Sortwell CE, Luk KC, Cremades N, Gottler LM, Froula J, Duffy MF, Lee VMY, Martinez TN, Dave KD. Best Practices for Generating and Using Alpha-Synuclein Pre-Formed Fibrils to Model Parkinson's Disease in Rodents. J Parkinsons Dis. 2018;8(2):303-322. doi: 10.3233/JPD-171248. PMID: 29400668; PMCID: PMC6004926.
[6] Gentzel RC, Toolan D, Jinn S, Schachter JB, Ma L, Kahle PJ, Smith SM, Marcus JN. Intracranial administration of alpha-synuclein fibrils in A30P-synuclein transgenic mice causes robust synucleinopathy and microglial induction. Neurobiol Aging. 2021 Oct;106:12-25. doi: 10.1016/j.neurobiolaging.2021.05.012. Epub 2021 Jul 3. PMID: 34225000.