實(shí)驗(yàn)室里經(jīng)常聽(tīng)到這樣的對(duì)話：
“轉(zhuǎn)染效率怎么樣？看得見(jiàn)嗎？”
“看不見(jiàn)啊，只能先篩克隆碰運(yùn)氣了……已經(jīng)挑了三天了，眼都快花了。”
做基因敲入、構(gòu)建報(bào)告細(xì)胞系的科研人都懂：最大的痛點(diǎn)不是技術(shù)本身，而是實(shí)驗(yàn)過(guò)程看不見(jiàn)——不知道轉(zhuǎn)染有沒(méi)有成功，不知道編輯效率有多高，不知道陽(yáng)性細(xì)胞在哪里。
于是只能不斷挑克隆、跑PCR、做測(cè)序驗(yàn)證。時(shí)間和精力花了不少，但結(jié)果往往像開(kāi)盲盒。
有沒(méi)有辦法讓基因編輯變得可見(jiàn)、可控、可預(yù)判？
答案是—帶熒光標(biāo)簽的Cas9。
01 從“盲操”到“可視化編輯”
EGFP Cas9 效果圖（配圖由AI輔助創(chuàng)作，僅作參考）
將EGFP直接融合在Cas9蛋白上，轉(zhuǎn)染完成無(wú)需等待基因組整合，也無(wú)需額外引入熒光質(zhì)粒。
在熒光顯微鏡下：
綠光細(xì)胞=成功轉(zhuǎn)入RNP復(fù)合物的細(xì)胞。
更重要的是，EGFP熒光是瞬時(shí)產(chǎn)生的，電轉(zhuǎn)后數(shù)小時(shí)即可通過(guò)流式細(xì)胞儀分選EGFP陽(yáng)性細(xì)胞，高效富集真正攝入RNP的細(xì)胞群體。后續(xù)只需繼續(xù)培養(yǎng)，讓donor DNA自然整合，即可獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)株。相比傳統(tǒng)的抗體篩選或者共轉(zhuǎn)熒光質(zhì)粒方案，整個(gè)流程更加直接、高效。
02 真實(shí)案例：構(gòu)建TEAD-HiBiT報(bào)告細(xì)胞系
以Advanced Science發(fā)表的一項(xiàng)研究為例。臨港實(shí)驗(yàn)室陸文超團(tuán)隊(duì)聯(lián)合煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院趙克浩團(tuán)隊(duì)及同濟(jì)大學(xué)楊靜團(tuán)隊(duì)開(kāi)發(fā)了TEAD降解劑KG-FP-003。為了評(píng)估降解劑對(duì)不同TEAD亞型（TEAD1–4）的活性，團(tuán)隊(duì)需要構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)內(nèi)源HiBiT標(biāo)簽的TEAD細(xì)胞系。
圖例）論文Methods部分原文截圖，可見(jiàn)研究團(tuán)隊(duì)采用NLS-Cas9-EGFP組裝RNP復(fù)合物進(jìn)行基因編輯。（Adv. Sci. 2025）
研究中使用NLS?Cas9?EGFP Nuclease（Cat.No.:E379-01A)成功構(gòu)建了HEK293T-HiBiT-KI-TEAD1、TEAD3、TEAD4細(xì)胞系。
在該策略中，研究人員采用了RNP電轉(zhuǎn)方式：
EGFP-Cas9 +靶向TEAD的sgRNA+donor DNA組裝RNP；
電轉(zhuǎn)進(jìn)入細(xì)胞；
利用Cas9自帶的EGFP熒光快速識(shí)別并分選陽(yáng)性細(xì)胞；
擴(kuò)增培養(yǎng)后獲得穩(wěn)定Knock-in細(xì)胞系。
EGFP的作用看似簡(jiǎn)單，卻極其關(guān)鍵——它讓“陽(yáng)性細(xì)胞富集”這一步從經(jīng)驗(yàn)判斷變成了可視化操作，大幅提升了后續(xù)篩選效率。
圖例）基于NLS?Cas9?EGFP Nuclease構(gòu)建的HiBiT?TEAD1/3/4細(xì)胞中，KG?FP?003呈濃度依賴性降解TEAD蛋白。（Adv. Sci. 2025, Fig. S4）
03 為什么選擇NLS-Cas9-EGFP Nuclease（Cat. No. E379）？
-
自帶EGFP熒光：轉(zhuǎn)染效率實(shí)時(shí)可見(jiàn)，流式分選進(jìn)行陽(yáng)性細(xì)胞富集；
-
雙核定位信號(hào)（NLS）：促進(jìn)Cas9高效入核，提高編輯效率；
-
RNP遞送方案：DNA?free，無(wú)基因組整合風(fēng)險(xiǎn)，脫靶率更低；
-
高純度（≥95%）、低內(nèi)毒素（<100 EU/mg）：適用于HEK293T、iPSC等敏感細(xì)胞。
04 適用場(chǎng)景
-
報(bào)告細(xì)胞系的構(gòu)建；
-
內(nèi)源標(biāo)簽敲入（HiBiT、GFP、mCherry等）；
-
藥物降解劑或抑制劑的篩選；
-
需要流式富集陽(yáng)性細(xì)胞的基因編輯項(xiàng)目。
基因編輯本身已經(jīng)足夠復(fù)雜。如果能讓實(shí)驗(yàn)過(guò)程“看得見(jiàn)”，很多原本依賴運(yùn)氣和經(jīng)驗(yàn)的步驟，都能變得更高效、更可控。NLS-Cas9-EGFP Nuclease或許不能讓編輯效率瞬間翻倍，但它能幫你少挑幾塊板、少跑幾次膠，也少熬幾個(gè)篩克隆的夜。
產(chǎn)品推薦
近岸蛋白提供RNP體系的Cas9蛋白和sgRNA體外轉(zhuǎn)錄試劑盒，并提供RNP體系敲除Protocol，掃描下方二維碼申請(qǐng)！
相關(guān)產(chǎn)品推薦
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
||
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|