當地時間11月06日至10日，2024年度的第39屆癌癥免疫治療學會（SITC）年會在美國休斯敦舉行。沙礫生物參加此次大會，分享由天澤云泰AaCas12b^Max技術平臺支持制備下一代基因編輯型TIL的研究成果。近岸蛋白為本研究提供AaCas12b^Max的樣品。

TIL（腫瘤浸潤淋巴細胞）在黑色素瘤等多種實體瘤中顯示出良好的治療效果，并顯著延長了晚期患者的生存期。然而對于一些淋巴細胞浸潤較差的“冷腫瘤”來說，TIL的療效仍有待評估和改善。開發下一代基因編輯型TIL療法，將會是提高TIL功能的理想策略。

Cas12b是CRISPR家族中的一種效應核酸酶，在保持高效編輯效率的同時，在編輯精度上超過了目前常用的SpCas9核酸酶，可以用于有效地降低脫靶毒性，成為基因編輯應用的理想選擇。在本項研究中，沙礫生物應用天澤云泰AaCas12b^Max技術，開發具有雙基因敲除的下一代腫瘤浸潤淋巴細胞（TIL）產品——GT300。

本項目在設計AaCas12b^Max的sgRNA的過程時，利用了計算機輔助預測技術，降低全基因錯配的風險。后續在HEK293細胞和人PBMC T細胞中，篩選了更為優選的sgRNA，用于進一步評估其在TIL產品中的編輯效率和編輯效果。

結果顯示，篩選后的sgRNA用于AaCas12b^Max系統對TIL細胞進行基因敲除，具有和傳統SpCas9系統類似的敲除效率。在小鼠PDX模型中，還進一步驗證了AaCas12b^Max基因敲除后TIL，與傳統SpCas9系統相當，具有良好的細胞殺傷能力、體外細胞因子釋放能力和腫瘤抑制效果。

值得注意的是，由AaCas12b^Max編輯后的TIL產品，細胞擴增能力和細胞存活能力得到顯著的提高，TIL擴增后產生的總細胞數增加了3-5倍。更進一步地，這些AaCas12b^Max編輯后的TIL產品表現出更高的細胞干性、更低的耗竭特征和凋亡率、以及在體內回輸后更強的擴增能力（Fig 1）。

這表明，相對于傳統SpCas9系統基因編輯會對TIL產品造成應激損傷，AaCas12b^Max編輯損傷更小、編輯的后TIL產品能夠具有更好的細胞狀態。

RNA-seq組學研究進一步發現，AaCas12b^Max編輯后T細胞產品的DNA修復速度更快，同時細胞凋亡低于SpCas9（Fig 2）；以及在細胞焦亡和耗竭通路異常激活等細胞狀態受損方面，AaCas12b^Max也相對于SpCas9編輯有所改善。

同時，SITE-seq和GUIDE-seq分析發現，AaCas12b^Max編輯后的TIL產品中的脫靶位點明顯減少，脫靶效應明顯降低（Fig 3）。另外通過PEM-seq進行染色體易位分析，也發現AaCas12b^Max引起的染色體易位事件更少。

本次AaCas12b^Max技術用于TIL編輯的結果表明，AaCas12b^Max編輯能夠在 TIL產品中實現高編輯效率和最小的脫靶效應，并且能夠顯著提高TIL產品的擴增能力、細胞活率、以及體內回輸后的體內適應性。

特別感謝近岸蛋白進行AaCas12b^Max工藝開發和優化，并為本研究提供酶的樣品。

沙礫生物應用天澤云泰AaCas12b^Max技術，開發了具有雙基因敲除的下一代TIL產品——GT300。目前，該產品的臨床研究也正在進行，接受各類晚期不可切除或轉移性實體瘤受試者評估入組；相關受試者招募、入組和臨床研究工作，正持續在多家臨床中心開展。