在生物制品質量體系中，細菌內毒素檢測（Bacterial Endotoxins Test, BET）是確保注射類制劑安全性的關鍵放行指標。隨著蛋白藥物、抗體制劑以及細胞與基因治療產品的快速發展，樣本基質復雜性顯著提升，對檢測方法的特異性、穩健性與可持續性提出更高要求。

圍繞方法一致性、基質干擾及低內毒素回收（LER）風險三大核心問題，我們開展了系統研究，本篇對關鍵數據進行綜合性技術總結。

新年伊始，為助力實驗室快速推進內毒素檢測方法升級與驗證工作，我們特別推出三重開年福利，覆蓋現場DEMO演示、rFC試劑盒搶先試用以及完整驗證資料支持，全方位助力您高效完成方法驗證與體系優化。

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在生物制品研發與生產過程中，鱟試劑動態顯色法（LAL）與重組C因子法（rFC）是當前主流檢測技術路線。行業核心關注點在于：在多類型真實樣本中，兩種方法是否具備等效檢測能力與可替代性。

在真實生產環境中，BET樣品往往處于復雜的制劑或工藝緩沖體系中，氨基酸、表面活性劑、多組分鹽離子等成分可能對檢測體系產生基質干擾。根據USP、EP、ChP要求，在特定樣品基質中開展BET前必須完成基質干擾驗證，以確保加標回收率在50%–200%之間。若方法抗干擾能力不足，需提高樣品稀釋倍數來消除基質影響。但過度稀釋可能導致內毒素信號低于檢測限，引發假陰性風險。

（1）所需稀釋倍數更低：在含PF68的PBS體系中，rFC在20倍稀釋下即可滿足回收率要求，而LAL需更高稀釋倍數。

（2）回收率更穩定：在復合緩沖體系中，rFC在2–200倍稀釋范圍內回收率穩定維持在107%–115%。

（3）更適合超低內毒素場景：由于基質耐受性更強，rFC可在較低稀釋條件下完成檢測，避免因過度稀釋導致假陰性風險。

從上述結果可看出，rFC法在多種復雜基質中表現出更強且更穩定的抗基質干擾能力，對于超低內毒素控制場景更具優勢。

近年來，LER（Low Endotoxin Recovery，低內毒素回收）成為BET檢測領域的重點挑戰。LER指在既定持留時間內，即便方法學驗證顯示無干擾，加標回收率仍低于50%的現象。

不同于傳統BET抑制干擾，LER具有：時間依賴性、稀釋不可逆性、結構重排相關性，FDA已明確在BLA階段需開展LER hold-time研究。

現有文獻與PDA技術報告TR82顯示，LER的關鍵誘發因素有：螯合劑（EDTA、檸檬酸鹽、磷酸鹽）以及非離子表面活性劑（Tween 20、Tween 80）等。LER通常通過兩步機制發生：首先螯合劑破壞維持LPS聚集體穩定的二價陽離子橋，使其結構松散；隨后表面活性劑嵌入并重排聚集結構，遮蔽脂質A，從而阻斷其與LAL或rFC的結合，導致可檢測內毒素活性降低。

針對上述問題，我們自主研發了LER樣本稀釋緩沖液，配套重組C因子內毒素檢測試劑盒，可有效緩解螯合劑或表面活性劑導致的內毒素掩蔽問題，確保復雜基質中內毒素的準確檢測。

（1）消除EDTA及Tween干擾

當EDTA≥0.1mM、Tween20≥0.01%或Tween80≥0.05%時，常規用內毒素檢測用水稀釋無法恢復加標回收率，結果偏離藥典規定的50–200%范圍。采用LER樣本稀釋緩沖液可有效消除上述干擾，使加標回收率符合藥典要求。

（2）降低LER的時間依賴性影響

LER干擾隨樣本存放時間延長而增強。實驗表明，無論在檢測前24h預處理還是檢測當日處理，使用LER樣本稀釋緩沖液后，加標回收率均保持穩定并符合理論值，證明其可有效抑制LER相關的時間依賴性干擾。

基于系統的方法學一致性驗證、復雜基質耐受性評估及LER風險機制與控制研究數據顯示，重組C因子內毒素檢測技術已建立充分的科學依據與應用驗證基礎，證明其在檢測準確性、方法穩健性及復雜樣本適用性方面具備可靠性能，支持其在現代生物制藥質量體系中的廣泛應用。