體外血腦屏障（BBB）模型是研究藥物或分子穿過BBB能力的重要工具。本文以hCMEC/D3細胞為例，介紹構建體外BBB通透性實驗的關鍵步驟。
首先，將hCMEC/D3細胞接種于Transwell膜上，使用內皮細胞專用培養基（如EGM-2或EndoGRO）在37℃、5% CO?條件下培養5-7天，形成緊密的單層屏障。實驗前，Transwell膜需用膠原蛋白或纖維連接蛋白包被，以增強細胞附著和屏障功能。
實驗時，在Transwell上室加入含測試樣品（如藥物、抗體或納米顆粒）的培養基，下室加入完全培養基。孵育后，于特定時間點（如2小時、4小時、24小時）收集下室液體。使用熒光標記物（如FITC-Dextran）作為對照，通過熒光分光光度計或高效液相色譜（HPLC）檢測樣品濃度，計算轉胞效率（TE）。
通透性計算公式為：
通透性 (%) = (基底側濃度 × 基底側體積) / (樣品側濃度× 樣品側體積) × 100%。
該實驗通過模擬BBB的屏障功能，評估藥物或分子穿過BBB的能力，為中樞神經系統（CNS）藥物開發提供重要依據。hCMEC/D3細胞構建的體外BBB模型具有高TEER值和良好的屏障特性，適用于高通量篩選、大分子藥物滲透性研究及BBB轉運機制探索。
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體外BBB模型中的通透性（轉胞吞作用）檢測平臺：
我們用hCMEC/D3， bEnd.3 和U251構建了一系列的體外血腦屏障模型用于檢測抗體透過血腦屏障的通透性。
