?免疫細(xì)胞在受到外源抗原刺激時(shí)，會(huì)通過(guò)調(diào)節(jié)共刺激信號(hào)的激活以及共抑制信號(hào)的抑制，以免發(fā)生自身免疫及組織損傷。這些免疫激動(dòng)劑以及免疫抑制劑組成免疫檢查點(diǎn)，精確調(diào)控免疫細(xì)胞的功能。免疫共刺激的靶點(diǎn)主要集中在B7-CD28家族和TNFR家族。B7-CD28家族中，CD28和ICOS為主要的共刺激受體；OX40、CD40、CD27、4?1BB、GITR、CD30同屬TNFR家族。
近20年，以PD-1/PD-L1為靶點(diǎn)的免疫檢驗(yàn)點(diǎn)抑制劑，已經(jīng)在腫瘤免疫治療領(lǐng)域取得突破性進(jìn)展。然而，針對(duì)共刺激免疫檢查點(diǎn)激動(dòng)性抗體（Agonist antibody）的藥物研發(fā)，在近15年的研究中并未取得較高的成果。以ICOS為靶點(diǎn)的抗體GSK3359609臨床三期試驗(yàn)的開(kāi)啟令人關(guān)注，一些制藥公司和生物技術(shù)公司并未放棄共刺激激動(dòng)型抗體藥物的研究，尤其是以更好療效和更低毒性的第二代抗體備受矚目。
Tab 1 共激活靶點(diǎn)在研抗體藥物臨床數(shù)據(jù)（數(shù)據(jù)來(lái)源：藥渡）
CD28是首個(gè)被靶向的共刺激受體，但是在臨床一期試驗(yàn)中出現(xiàn)細(xì)胞因子風(fēng)暴等涉及安全問(wèn)題。相比CD28，OX40、CD40、CD27、4?1BB、GITR和ICOS共刺激受體靶點(diǎn)更為安全。激動(dòng)性抗體是否發(fā)揮最佳效果受多種因素制約。受體集聚程度、Fc/FcγR結(jié)合、抗體亞型、效價(jià)、受體占有率、是否完全阻斷天然配體/受體結(jié)合等因素都有可能影響激動(dòng)性抗體活性。
OX40 Ligand、CD40 Ligand、CD27 Ligand、4?1BB Ligand、GITR Ligand 、CD30 Ligand等共刺激免疫激動(dòng)劑在天然狀態(tài)下常以膜錨定或可溶的三聚體形式存在，天然聚集狀態(tài)是決定其生物活性和生理功能的重要性質(zhì)之一，也是抗體藥物成功快速開(kāi)發(fā)的先決條件。獨(dú)特的三聚體結(jié)構(gòu)有效促進(jìn)和對(duì)應(yīng)的受體結(jié)合和三聚化，進(jìn)而有效的激發(fā)下游通路，引起包括細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞凋亡、炎癥激活等生理功能。
使用具有天然三聚體結(jié)構(gòu)的蛋白免疫得到的抗體，在體內(nèi)將能更好的識(shí)別天然抗原表位，有效的阻斷受體和配體的結(jié)合，達(dá)到預(yù)期的治療效果。只有正確折疊和構(gòu)象的重組靶點(diǎn)蛋白才能有效保證抗體藥物研發(fā)過(guò)程的順利進(jìn)行。因此，抗體藥物的開(kāi)發(fā)用重組靶點(diǎn)蛋白必須具有正確的聚集狀態(tài)和結(jié)構(gòu)，保證靶點(diǎn)蛋白正確的生物活性和功能。
ACROBiosystems從靶點(diǎn)蛋白開(kāi)始，致力于更好的生物醫(yī)藥，已針對(duì)激動(dòng)型抗體多種熱門靶點(diǎn)開(kāi)發(fā)了100余種不同種屬、不同標(biāo)簽的重組蛋白產(chǎn)品，重組三聚體蛋白真實(shí)的分子量和聚體狀態(tài)經(jīng)MALS驗(yàn)證，適用于免疫、抗體篩選、SPR、細(xì)胞活性檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)。并將研發(fā)人員實(shí)際的實(shí)驗(yàn)操作和參數(shù)整理成了相應(yīng)的protocol免費(fèi)提供，后續(xù)更有過(guò)表達(dá)細(xì)胞株、各靶點(diǎn)相關(guān)功能細(xì)胞株等產(chǎn)品上線，為激動(dòng)型抗體研發(fā)助力。
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Proteins |
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對(duì)于激動(dòng)性抗體，IgG亞類Fc段與FcγR的結(jié)合也會(huì)影響其激動(dòng)活性。例如與不同受體結(jié)合產(chǎn)生更強(qiáng)激動(dòng)效應(yīng)，不同F(xiàn)cγR結(jié)合，引起激動(dòng)效應(yīng)不同。由于抗體亞型不同，受體多樣引起下游激動(dòng)效應(yīng)機(jī)制復(fù)雜。有報(bào)道顯示FcγRIIB對(duì)于靶向CD28、CD40、OX40和4?1BB的激動(dòng)劑活性不可或缺，IgG2亞類抗體可以避免ADCC和ADCP的干擾來(lái)判斷其激動(dòng)性。
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Fig.1 The purity of Human OX40 Ligand, His Tag, active trimer (Cat. No. OXL-H52Q8) was more than 95% and around 60-80 kDa verified by SEC-MALS.
>>>> ELISA
Fig.2 Human 4-1BB Ligand (71-254), His,Flag Tag (active trimer) (MALS verified) (Cat. No. 41L-H52D4) induce IL-8 secretion in HT1080 human CD137 cell line. The EC50 for this effect is 0.20-0.44 μg/mL (Routinely tested).
>>>> FACS
Fig.4 FACS analysis shows that Human CD40 Ligand, Fc Tag (active trimer) (MALS verified) (Cat. No.CDL-H5269) can bind to 293T-CD40 cells surface CD40. The concentration of Human CD40 Ligand is 0.3 μg/mL (Routinely tested).
>>>> Cell based assay
Fig.3 Human B7-H3, His Tag (Cat. No.B73-H52E2) inhibits Anti-CD3-induced proliferation of PBMC. The EC50 for this effect is 2.24-3.36 μg/mL (Routinely tested).
>>>> SPR
Fig5. Anti-TNFSF11 (human IgG1) captured on CM5 chip via Anti-human IgG Fc antibodies surface can bind Human TNFSF11, His Tag (active trimer) (MALS verified) (Cat. No. RAL-H5240) with an affinity constant of 0.274 nM as determined in a SPR assay (Biacore T200) (Routinely tested).
>>>> BLI
Fig.6 Loaded Human 4-1BB Ligand (71-254), Fc Tag (active trimer) (MALS verified) (Cat. No. 41L-H5265) on Protein A Biosensor, can bind Cynomolgus / Rhesus macaque 4-1BB, His Tag (Cat. No.41B-C52H4) with an affinity constant of 10.3 μM as determined in BLI assay (ForteBio Octet Red96e) (Routinely tested).
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