?免疫細胞在受到外源抗原刺激時，會通過調節共刺激信號的激活以及共抑制信號的抑制，以免發生自身免疫及組織損傷。這些免疫激動劑以及免疫抑制劑組成免疫檢查點，精確調控免疫細胞的功能。免疫共刺激的靶點主要集中在B7-CD28家族和TNFR家族。B7-CD28家族中，CD28和ICOS為主要的共刺激受體；OX40、CD40、CD27、4?1BB、GITR、CD30同屬TNFR家族。
近20年，以PD-1/PD-L1為靶點的免疫檢驗點抑制劑，已經在腫瘤免疫治療領域取得突破性進展。然而，針對共刺激免疫檢查點激動性抗體（Agonist antibody）的藥物研發，在近15年的研究中并未取得較高的成果。以ICOS為靶點的抗體GSK3359609臨床三期試驗的開啟令人關注，一些制藥公司和生物技術公司并未放棄共刺激激動型抗體藥物的研究，尤其是以更好療效和更低毒性的第二代抗體備受矚目。
Tab 1 共激活靶點在研抗體藥物臨床數據（數據來源：藥渡）
CD28是首個被靶向的共刺激受體，但是在臨床一期試驗中出現細胞因子風暴等涉及安全問題。相比CD28，OX40、CD40、CD27、4?1BB、GITR和ICOS共刺激受體靶點更為安全。激動性抗體是否發揮最佳效果受多種因素制約。受體集聚程度、Fc/FcγR結合、抗體亞型、效價、受體占有率、是否完全阻斷天然配體/受體結合等因素都有可能影響激動性抗體活性。
OX40 Ligand、CD40 Ligand、CD27 Ligand、4?1BB Ligand、GITR Ligand 、CD30 Ligand等共刺激免疫激動劑在天然狀態下常以膜錨定或可溶的三聚體形式存在，天然聚集狀態是決定其生物活性和生理功能的重要性質之一，也是抗體藥物成功快速開發的先決條件。獨特的三聚體結構有效促進和對應的受體結合和三聚化，進而有效的激發下游通路，引起包括細胞生長、細胞凋亡、炎癥激活等生理功能。
使用具有天然三聚體結構的蛋白免疫得到的抗體，在體內將能更好的識別天然抗原表位，有效的阻斷受體和配體的結合，達到預期的治療效果。只有正確折疊和構象的重組靶點蛋白才能有效保證抗體藥物研發過程的順利進行。因此，抗體藥物的開發用重組靶點蛋白必須具有正確的聚集狀態和結構，保證靶點蛋白正確的生物活性和功能。
ACROBiosystems從靶點蛋白開始，致力于更好的生物醫藥，已針對激動型抗體多種熱門靶點開發了100余種不同種屬、不同標簽的重組蛋白產品，重組三聚體蛋白真實的分子量和聚體狀態經MALS驗證，適用于免疫、抗體篩選、SPR、細胞活性檢測等實驗。并將研發人員實際的實驗操作和參數整理成了相應的protocol免費提供，后續更有過表達細胞株、各靶點相關功能細胞株等產品上線，為激動型抗體研發助力。
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對于激動性抗體，IgG亞類Fc段與FcγR的結合也會影響其激動活性。例如與不同受體結合產生更強激動效應，不同FcγR結合，引起激動效應不同。由于抗體亞型不同，受體多樣引起下游激動效應機制復雜。有報道顯示FcγRIIB對于靶向CD28、CD40、OX40和4?1BB的激動劑活性不可或缺，IgG2亞類抗體可以避免ADCC和ADCP的干擾來判斷其激動性。
ACROBiosystems可為您提供50+不同類型高活性FcγR，助力激動性抗體藥物評價。
Fig.1 The purity of Human OX40 Ligand, His Tag, active trimer (Cat. No. OXL-H52Q8) was more than 95% and around 60-80 kDa verified by SEC-MALS.
>>>> ELISA
Fig.2 Human 4-1BB Ligand (71-254), His,Flag Tag (active trimer) (MALS verified) (Cat. No. 41L-H52D4) induce IL-8 secretion in HT1080 human CD137 cell line. The EC50 for this effect is 0.20-0.44 μg/mL (Routinely tested).
>>>> FACS
Fig.4 FACS analysis shows that Human CD40 Ligand, Fc Tag (active trimer) (MALS verified) (Cat. No.CDL-H5269) can bind to 293T-CD40 cells surface CD40. The concentration of Human CD40 Ligand is 0.3 μg/mL (Routinely tested).
>>>> Cell based assay
Fig.3 Human B7-H3, His Tag (Cat. No.B73-H52E2) inhibits Anti-CD3-induced proliferation of PBMC. The EC50 for this effect is 2.24-3.36 μg/mL (Routinely tested).
>>>> SPR
Fig5. Anti-TNFSF11 (human IgG1) captured on CM5 chip via Anti-human IgG Fc antibodies surface can bind Human TNFSF11, His Tag (active trimer) (MALS verified) (Cat. No. RAL-H5240) with an affinity constant of 0.274 nM as determined in a SPR assay (Biacore T200) (Routinely tested).
>>>> BLI
Fig.6 Loaded Human 4-1BB Ligand (71-254), Fc Tag (active trimer) (MALS verified) (Cat. No. 41L-H5265) on Protein A Biosensor, can bind Cynomolgus / Rhesus macaque 4-1BB, His Tag (Cat. No.41B-C52H4) with an affinity constant of 10.3 μM as determined in BLI assay (ForteBio Octet Red96e) (Routinely tested).
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