輔助性T細胞17（T helper 17 cell, Th17）作為一類獨特的CD4+T細胞亞群，最顯著的特點是分泌IL-17家族細胞因子。Th17的特異性轉錄因子為RORγt/RORC2，區別于T-bet（Th1）和GATA3（Th2），其獨特定位功能為抗真菌/胞外菌+驅動自身免疫和慢性炎癥，它自2005年被發現以來便成為免疫研究的熱點。

2025年5月，北京協和醫院風濕免疫科李夢濤主任團隊與浙江大學楊雋研究員團隊合作，揭示了Activin A/ALK4信號通路在Th17細胞和肺血管內皮細胞中的雙重作用機制，為紅斑狼瘡相關肺動脈高壓的治療提供了新靶點。

研究團隊設計了Th17細胞與肺血管內皮細胞共培養體系，發現當Th17細胞過表達Activin A的受體ALK4時，可強力誘導內皮細胞發生內皮-間質轉化——這是肺血管重塑的核心病理過程^[1]。

四川大學華西醫院張敦房研究員團隊的突破性研究，揭示了過繼性Treg細胞治療會促進致病性Th17細胞的分化和積累，進而影響Treg細胞治療的療效，并且提出了創新性治療方案——在輸注Treg細胞的同時阻斷IL-6/STAT3信號通路。這種聯合治療策略可通過抑制Treg細胞介導的致病性Th17細胞分化，顯著提升Treg細胞治療的療效^[2]。

浙江大學醫學院蔡志堅/沈穎穎團隊的研究發現了新的誘導腸道Th17細胞生成的細菌——糞產堿菌。

值得注意的是，糞產堿菌在人類生活環境中的普遍存在，團隊發現該菌在成人糞便的檢出率高達86%（86/100），而此前被認為是誘導腸道Th17細胞主要細菌的分節絲狀菌在成人糞便中的檢出率為0%（0/100）^[3]。

Th17 細胞在人和小鼠中的分化路徑^[4]

利用密度梯度離心液將全血樣本中的PBMC離心出來

1. 1 使用CD4+ Naive T細胞分選試劑標記PBMC。一般來說，需在4℃下孵育20-30 min。

2. 2 加入鏈霉親和素（Streptavidin）偶聯的磁珠，在4℃下繼續孵育20-30 min。

3. 3 將孵育用的U型管置于專用磁力架上，室溫靜置5 min。

4. 4 將管中的細胞導入新的U型管中，即為Naive T細胞。

5. 5 為確保純度，可以重復分選步驟。

1. 1 使用PBS稀釋抗CD3(Cat.No.:GMP-A018)和抗CD28抗體(Cat.No.:GMP-A063），稀釋至工作濃度分別5-10 µg/mL和5-10 µg/mL。

2. 2 按照1 mL/孔加稀釋后的抗CD3/CD28抗體至24孔板，37℃細胞培養箱中孵育60 min（在4℃過夜孵育效果更佳）。

3. 3 使用PBS將包被后的孔清洗兩次。

   注意：也可使用抗CD3/CD28磁珠(Cat.No.:GMP-B016)進行激活，在細胞鋪板時，按照磁珠和細胞1:1的比例進行混合即可。

Expansion of the human PBMCs. Cells were stimulated with Anti- Human CD3/CD28 Beads (Cat.No.:GMP-B016) , and expanded with human IL-2 (Cat.No.:C013) for 14 days.(Data were kindly provided by Novoprotein's customer. Thanks for her contribution)

4. 4 配置Th17分化培養基（Th17-DM）

• RPMI 1640完全培養、β-巰基乙醇 (50 μM)

• 細胞因子

  

• 抗體： 抗人IFN-γ抗體 (10 μg/mL) + 抗人IL-4抗體 (10 μg/mL)

  注意：成分確定的T細胞無血清培養基可以替代RPMI 1640完全培養基（含血清），該類培養基的批次穩定性較含血清培養基要好。

5. 5 使用Th17-DM重懸分選后的Naive T細胞，將濃度調整以2×10⁵ cells/mL。

6. 6 按照1 mL/孔的量加入已包被抗CD3/CD28抗體的24孔板中，在37℃，5%CO₂的環境下持續培養7天。每1~2天進行半換液。

1. 1 取部分Th17細胞，用含有50 ng/mL PMA的Th17-DM重懸，并于細胞培養箱中孵育1 h。

2. 2 加入3.0 μM蛋白轉運抑制劑Monensin，繼續培養3 h。

3. 3 使用流式細胞術對細胞進行鑒定。

4. 4 胞外標志物：CD4、TGF-βR、IL-6 Rα、IL-21R、IL-23R

   胞內/核內標志物：IL-17A、RORα/NR1F1、RORγt/RORC2/NR1F3

近岸蛋白提供T細胞體外激活培養以及Th17細胞分化的所需的抗體、人源和鼠源細胞因子，包括IL-2、IL-1β、IL-6、IL-23、TGF-β1、抗CD3抗體、抗CD28抗體等，并能提供批間穩定一致的GMP級產品，支持向臨床無縫過渡轉化。