關于BTK的PROTAC進展很快,在研的項目較多,機理相對清晰,也有對應點突變引起的耐藥機制,此處正是PROTAC分子發揮作用的空間,適合早期用于驗證PROTAC分子的設計原理。關于BTK的體外實驗和體內實驗相對完善,主要篩選方法有:
酶學活性的抑制,優化BTK binder的親和力,也可用SPR, MST, ITC, BLI, REFEYN等技術評價蛋白親和力、三元復合的形成。細胞水平的的降解可在Ramos,OCI-LY10細胞中進行,根據目前的經驗,各種方法如WB、數字化Jess、通量化ICW和IFA等技術,都適合檢測BTK和pBTK水平,得益于優質的抗體,對于通量的篩選,也有構建HiBiT敲入的細胞系,快速的篩選可降解BTK蛋白的PROTAC分子,對應細胞增殖的結果也相對清晰。
機制研究上可以通過ADME的方法、蛋白組學、結構生物學等手段,評價PROTAC分子在細胞內發揮作用的機制,也可以通過抑制劑的手段研究蛋白降解通路的特異性等等。針對更新的BTK突變,還有很多工作需要進行。

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