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隨著越來越多的生物制品（重組蛋白疫苗、Vero細胞疫苗、細胞治療/基因治療藥物等）進入治療領域，生物制品的質量控制也日趨嚴格，其中核酸殘留因其潛在的危害性，是各類質控標準的重中之重。我國參照WHO、FDA和歐盟標準，在藥典中明確規定酵母、大腸桿菌表達的生物制品中DNA殘留量不超過10ng/劑量。我國2020年藥典將人用狂犬病疫苗（Vero細胞）DNA殘留標準更新為≤3ng/劑量。除了殘留量的規定，FDA、CDE發布的相關指導文件中建議，殘留的細胞宿主DN**段不能超過一個功能基因的長度（約200bp）1，2。因此，在生物制品的生產工藝中必須有去除核酸殘留的步驟，確保生物制品的中的核酸殘留滿足相應法規的要求。
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| 近岸蛋白提供高品質GMP級全能核酸酶（BenzoNuclease?）及高性能配套全能核酸酶殘留檢測試劑盒（檢測范圍0.014-10ng/ml），靈敏度高，為生物制品解決核酸殘留困擾。 |
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在核酸殘留去除工作中，難點是由于DNA帶有大量的電荷易與其他生物大分子結合從而產生聚集（吸附）、包裹作用而難以完全除去。傳統的方法均存在低含量核酸殘留去除不凈、工作量大耗時長的缺陷。全能核酸酶是一種來自于erratia marcescens，經基因工程改造的核酸內切酶，可降解雙鏈、單鏈、線狀、環狀的DNA和RNA，完全將核酸降解成3~5個堿基長度的5'-單磷酸寡核苷酸。目前已廣泛應用于病毒載體疫苗、基因與細胞治療等企業的病毒純化工藝中。
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生物制品領域迎空前發展機遇，供應鏈協同需加強
2021年12月30日，國家藥監局等8部門聯合印發《“十四五”國家藥品安全及促進高質量發展規劃》，提出支持藥品、醫療器械、疫苗等領域的創新發展，推動關鍵核心技術攻關，促推解決產業創新發展的“卡脖子”問題，提升產業整體水平。
同日，工信部等9部門聯合印發《“十四五”醫藥工業發展規劃》，提出在疫苗領域，重點發展新型新冠病毒疫苗、皰疹疫苗、多價人乳頭瘤病毒（HPV）疫苗、多聯多價疫苗等產品。在其它領域，重點發展針對新靶點、新適應癥的嵌合抗原受體 T 細胞（CAR-T）、嵌合抗原受體 NK 細胞（CAR-NK）等免疫細胞治療、干細胞治療、基因治療產品和特異性免疫球蛋白等。重點開發超大規模（≥1 萬升/罐）細胞培養技術，雙功能抗體、抗體偶聯藥物、多肽偶聯藥物、新型重組蛋白疫苗、核酸疫苗、細胞治療和基因治療藥物等新型生物藥的產業化制備技術，生物藥新給藥方式和新型遞送技術，疫苗新佐劑。強調新型疫苗研發和產業化能力建設。緊跟疫苗技術發展趨勢，基于應對新發、突發傳染病需求，支持建設新型病毒載體疫苗、脫氧核糖核酸（DNA）疫苗、信使核糖核酸（mRNA）疫苗、疫苗新佐劑和新型遞送系統等技術平臺，推動相關產品的開發和產業化。鼓勵疫苗生產企業開展國際認證，按照國際疫苗采購要求生產、出口疫苗。
《“十四五”醫藥工業發展規劃》鼓勵疫苗生產企業和關鍵原輔料、耗材、設備企業加強協作，針對應急狀態下可能出現的峰值需求，提高供應鏈應急適配能力。提高疫苗供應鏈保障水平。支持疫苗企業和重要原輔料、耗材、生產設備、包裝材料企業協作，提高各類產品質量技術水平。
目前全能核酸酶的應用市場主要還是被國外企業占據，其價格高、供貨周期長，且受疫情和國際貿易政策影響，存在供應中斷風險。因此，生物制品生產企業需要將視線轉向國內同類產品，這也符合目前國產供應鏈建設的大趨勢。
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近岸蛋白全能核酸酶質優價廉
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近岸蛋白提供GMP級條件下生產的BenzoNuclease?，無動物源性，無氨芐青霉素，可高效降解單鏈、雙鏈、線性、環狀、超螺旋等任何形式的DNA及RNA。質量、性能、供貨能力可靠，并已完成在FDA的藥物主文件（Drug Master File, DMF）申報備案，滿足藥物申報的規范。
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什么是全能核酸酶？
BenzoNuclease?是一種來自于Serratia marcescens，經基因工程改造的核酸內切酶。BenzoNuclease?可降解單鏈、雙鏈、線性、環狀、超螺旋等任何形式的DNA及RNA，將核酸完全降解成3~5個堿基長度的5'-單磷酸寡核苷酸。因其能高效降解任何形式的 DNA 和 RNA，又被稱為“全能核酸酶”。
無論在實驗室研究還是在工業級生產的過程中，BenzoNuclease?是去除生物制品中所有形式DNA和RNA的一種有效工具酶。通過高效的核酸去除，可顯著提升后續實驗、生產的效果及產量，性能優于其他核酸去除方法。
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近岸蛋白全能核酸酶的應用
● 去除疫苗類產品外源性核酸，降低核酸殘留毒性風險，提高產品安全性，如病毒疫苗、溶瘤病毒、細胞和基因治療病毒載體的純化
● 降低細胞/細菌裂解時核酸釋放產生的黏度，縮短處理時間，提高病毒/蛋白產量
● 去除纏繞在顆粒（病毒、包涵體等）表面的核酸，利于顆粒的釋放和純化
● ELISA、柱層析、二維電泳和印跡分析的樣品制備，經核酸酶處理后可提高分辨率和回收率
● 用于預防細胞的結團
● ……
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近岸蛋白全能核酸酶嚴格的質量控制及生產標準
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近岸蛋白全能核酸酶寬泛的反應條件
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近岸蛋白全能核酸酶優異的性能
1、保存穩定性以及凍融穩定性
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2、消化不同類型核酸
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3、鈉離子、鉀離子的影響
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4、Triton? X-100的影響
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近岸蛋白全能核酸酶殘留檢測試劑盒性能脫穎而出
在使用核酸酶處理過的生物制品中，可能存在微量的核酸酶殘留，這些微量殘留會對后續生物制品的應用造成一定的影響。生物制品中核酸酶的殘留量也是衡量生物制品質量的重要指標之一。
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近岸蛋白開發的核酸酶殘留檢測試劑盒可以高靈敏度（0.014ng/ml）、檢測范圍0.014-10.00ng/ml, 特異性地檢測和定量分析樣品中的全能核酸酶殘留。
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近岸蛋白產品信息：
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貨號 |
產品名稱 |
規格 |
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BenzoNuclease, GMP Grade |
100KU/200KU/5000KU |
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BenzoNuclease ELISA Kit |
96T |
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Q&A
1. 在哪一步中加入 BenzoNuclease?？
BenzoNuclease?可直接加入至細胞/細菌裂解液中進行作用。注意，若裂解液中不含Mg2+，需補加Mg2+至1-2mM。
2. 當反應溫度低于 37℃時，如何保證 BenzoNuclease?的消化效果？
在體系固定的情況下，BenzoNuclease?的消化效果主要取決于酶用量、反應溫度以及反應時間，當反應溫度較低時，為避免過多的 BenzoNuclease?引起的殘留問題，更加推薦延長反應時間來保證 BenzoNuclease?的消化效果。
3. BenzoNuclease?的抑制條件有哪些？
BenzoNuclease?可在較為寬泛的條件下保持活性，但 1-2mM Mg2+對其活性至關重要。
一般情況下，BenzoNuclease?的活性可被高鹽抑制，例如：> 500 mM 的一價陽離子（如 Na+、K+等）、>100 mM 的鹽酸胍（guanidine HCl）、> 100 mM 的磷酸鹽（phosphate）、> 100 mM 的硫酸銨（ammonium sulfate）等。此外，螯合劑也可通過螯合體系中的 Mg2+以達到抑制酶活的作用，通過加入更多的 Mg2+可恢復 BenzoNuclease?的活性（1mM 的 EDTA 可部分抑制 BenzoNuclease?活性，5mM 的 EDTA 可使其活性喪失約 90%。
4. BenzoNuclease?與蛋白酶抑制劑可以兼容嗎？
可以。但需要注意，最好選擇不含 EDTA 的蛋白酶抑制劑（≥1mM 的 EDTA 可抑制 BenzoNuclease? 的活性）。
5. 如何去除 BenzoNuclease?？
BenzoNuclease?融合了 6×His 標簽，可通過鎳柱將其去除。此外，也可結合所生產產品本身的純化工藝對BenzoNuclease?進行去除，如通過 TFF（tangential flow filtration）、透析及色譜（IEX, SEC, HIC）、超濾等。
6. BenzoNuclease?的應用是否有**限制？
無**限制。
7. 料液經過BenzoNuclease?處理后的核酸殘留使用什么方法檢測比較好？
推薦使用qPCR進行檢測，qPCR方法的靈敏度和重復性較好，并且可定量，可以對核酸殘留有更加準確的把握。
8. GMP-1707的儲存液中含有2mM MgCl2，加到樣品中之后，需要補加鎂離子嗎？
如果樣品溶液中不含鎂離子或者鎂離子濃度較低，建議補加鎂離子至全能核酸酶的最佳工作濃度（1-2mM）。
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參考文件：
1、 FDA《用于生產和傳染病適應癥的病毒疫苗的細胞基質和其他生物材料的特性和鑒定》；
2、 CDE《基因治療產品藥學研究與評價技術指導原則》。
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BenzoNuclease?是蘇州近岸蛋白質科技股份有限公司的注冊商標。其他商標歸其所有者所有。
蘇州近岸蛋白質科技股份有限公司，是一家專注于重組蛋白應用解決方案的高新技術企業，主營業務為靶點及細胞因子類蛋白、重組抗體、酶及試劑的研發、生產和銷售，并提供相關技術服務。公司定位為醫療健康與生命科學領域原料與技術解決方案的上游供應商，致力于為下游客戶提供及時、穩定、優質的產品及服務，助力全球生物醫藥企業和研究機構的技術與產品創新升級。
詳詢www.novoprotein.com.cn或致電400-600-0940。