抗體偶聯藥物（ADC）是由靶向特異性抗原的單克隆抗體與小分子細胞毒性藥物通過連接子鏈接而成，兼具傳統小分子化療的強大殺傷效應及抗體藥物的腫瘤靶向性。ADC由三個主要部分組成：負責選擇性識別癌細胞表面抗原的抗體，負責殺死癌細胞的藥物有效載荷，以及連接抗體和有效載荷的連接子。理想狀態下，ADC藥物進入體內后，抗體部分與表達腫瘤抗原的靶細胞特異性結合，ADC藥物被腫瘤細胞內吞后，進入溶酶體進行降解，小分子細胞毒藥物在胞內以高效活性形式被足量釋放，從而完成對腫瘤細胞的殺傷。
ADC在血漿中的穩定性對于各種物種來說是至關重要的，并且需要盡早考察，因為有效載荷釋放應該發生在目標位點，而循環中的不穩定可能會導致全身有效負載暴露增加造成有害的脫靶效應。因此評估ADC有效載荷釋放和釋放機制以及識別有效載荷代謝物非常重要。實驗設計時最關鍵的是選擇最佳的代謝系統。
ADC藥物的體外payload釋放實驗在肝S9組分、溶酶體環境或者靶細胞的孵育體系中完成。溶酶體能模擬靶細胞內的ADC代謝過程，可用于研究ADC的有效載荷釋放。但是，它們缺乏典型的藥物代謝酶（例如CYP和UGT），因此不能用于鑒定由釋放的有效載荷形成的進一步代謝物。相反，肝臟S9組分含有所有主要代謝酶，并且它們的使用不依賴于肝細胞中的主動或被動運輸。因此，通過適當選擇pH值，S9組分可用于研究有效載荷釋放和代謝。酸化的肝臟S9組分模擬溶酶體的酸性環境，進行ADC降解試驗是合適的。
Pfize的工作人員在體外實驗中[1]，將cleavable linker的ADC和non-cleavablelinker的ADC在溶酶體環境或者肝S9組分中孵育，模擬體內的代謝情況，將代謝產物用orbitrap高分辨質譜以DDA模式進行采集以鑒定代謝產物。Andrew等使用三重四級桿質譜以中性丟失掃描和前體離子掃描的方式也實現了對溶酶體降解的ADC藥物進行代謝產物鑒定[2]。
